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第一部分 细胞生物学实验方法和技术介绍3

第一章 光学显微镜3

一、 明视野显微镜3

二、 暗视野显微镜5

三、 相差显微镜6

四、 微分干涉差显微镜7

五、 荧光显微镜8

六、 偏光显微镜9

七、 激光扫描共焦显微镜9

八、 多光子荧光显微镜10

第二章 电子显微术12

一、 透射电子显微术12

二、 扫描电子显微术15

三、 电镜X射线微区分析技术17

第三章 定量细胞术20

一、 显微镜光度术20

二、 流式细胞术24

三、 图像处理和分析技术26

第四章 显微摄影30

一、 显微摄影装置30

二、 显微摄影程序32

三、 彩色显微摄影35

四、 荧光摄影36

第五章 放射性核素示踪技术37

一、 放射性核技术的核物理基础知识37

二、 生物学中放射性核素示踪技术40

三、 放射性样品的测量仪器及方法43

四、 放射性核素示踪实验中的放射卫生防护53

第六章 细胞培养技术58

一、 组织培养的概念58

二、 组织培养简史59

三、 组织培养的基本条件59

四、 培养方法61

五、 培养细胞的生物学61

第七章 凋亡细胞的识别68

一、 细胞凋亡与细胞坏死在形态学和生化特征方面的区别68

二、 调亡细胞的分子作用机制简介69

三、 观察凋亡细胞的方法71

四、 研究细胞凋亡的生物意义74

第八章 绿色荧光蛋白76

一、 GFP的发现76

二、 GFP的性质76

三、 GFP的发光机制与GFP突变蛋白76

四、 GFP的优点79

五、 GFP的应用前景80

六、 存在的问题81

第九章 反转录聚合酶链式反应82

一、 逆转录酶82

二、 反转录引物83

三、 模板RNA84

四、 反转录PCR（RT-PCR）的应用85

五、 存在的问题86

第二部分 学生实验91

实验1 口腔上皮细胞的显微镜观察91

一、 用荧光显微镜观察口腔上皮细胞的线粒体和细胞核91

二、 用相差显微镜观察口腔上皮细胞93

三、 用暗视野显微镜观察牙垢中的微生物95

实验2 电镜超薄切片97

实验3 动物细胞培养103

一、 清洗与灭菌103

二、 培养基的配制108

三、 Hanks,D-Hanks液和消化液（胰酶液）的配制110

四、 细胞传代培养113

五、 生长曲线的测定114

六、 细胞冻存与复苏116

七、 原代培养118

八、 新生牛血清的筛选119

九、 几种常见的细胞同步化方法121

实验4 显微摄影126

实验5 定量细胞测量的样品制作129

一、 细胞DNA含量定量测量的样品制作（Feulgen反应——用于显微镜光度计和图像分析仪的透射光测量）129

二、 细胞DNA含理定量测量的样品制作（PI荧光标记法——用于流式细胞仪的荧光测量）131

实验6 小鼠骨髓染色体的制备与C带染色134

一、 小鼠骨髓染色体的制备134

二、 染色体C带的制备136

实验7 保护性胶显影剂和硝酸银染核仁组织区的一步染色法138

实验8细胞骨架观察141

一、 考马斯亮蓝R250（Coomassie blueR250）染色法观察微丝141

二、 罗丹明标记的鬼笔环肽染色法观察微丝143

三、 动物细胞微管观察145

四、 植物细胞微管观察147

实验9 HeLa细胞与鸡红细胞的融合实验149

实验10 小鼠巨噬细胞吞噬羊红细胞实验151

实验11 着丝点蛋白的间接免疫荧光染色法123

实验12 三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡的形态和生化特征观察156

一、 三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡的形态观察156

二、 三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡的生化特征观察158

实验13 利用脂质体转染技术对HeLa细胞中重组GFP进行观察161

实验14 利用RT-PCT技术检测HeLa细胞中β-actin的表达163

实验15 放射性核素示踪技术及其应用166

一、 放射性核素制剂的衰变校正计算166

二、 几何位置对测量的影响及外照射防护原则167

三、 3H-TDR掺入细胞DNA的液闪测量168

四、 3H-TDR掺入DNA的显微放射自显影观察170

五、 皮质醇放射免疫分析173

附录179

附录1 显微镜物镜、目镜常用的上些符号说明179

附录2 电镜超薄切片缓冲液、固定液和染液的配制180

附录3 动物细胞培养182

附录4 显微摄影和显微放射自显影用溶液的配制184

附录5 常用荧光探针介绍186

附录6 用于Feulgen反应的试剂配制188

附录7 磷酸缓冲盐（Phosphate-buffered Saline，PBS，pH7.4）溶液的配制和各种值缓冲液的配制189

附录8 用于染色体和C带制备的溶液配制190

附录9 用于细胞骨架观察的溶液配制192

附录10 用于动物细胞融合和吞噬实验的试剂配制194

附录11 防荧光褪色固片介质、细胞粘贴和封片剂195

附录12 对HeLa细胞中重组CFP进行观察的试剂配制197

附录13 利用RT-PCR技术对HeLa细胞中β-actin的试剂配制199

附录14 放射性核素示踪技术常用数据200