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医药分子生物学实验目的与要求1

医药分子生物学实验学生守则2

上编 基础部分3

第1章 实验室安全防护知识3

1.1化学试剂安全防护知识3

有毒化学试剂3

腐蚀性化学试剂3

易燃易爆化学试剂4

强氧化性化学试剂4

放射性化学试剂5

1.2辐射防护知识5

基本概念5

辐射防护的基本要求6

辐射防护的基本方法6

放射性同位素的实验室使用基本要求7

1.3生物安全知识7

生物安全的含义7

微生物危险度评估8

实验室生物安全分级9

安全操作规程和管理制度11

1.4用电安全及其他安全知识12

安全用电12

使用高压容器的安全防护12

思考题12

第2章 分子生物学实验室标准及功能分区13

2.1生物学约束13

2.2物理学约束13

2.3标准实验室组成13

思考题14

第3章 分子生物学实验室常规仪器设备15

3.1紫外分光光度计15

相关术语15

分光光度计的基本结构15

分光光度法的测量误差16

测量条件选择16

紫外分光光度法在分子生物学中的应用16

3.2离心机17

离心分离方法17

离心机分类18

离心机配件——转子的选用19

离心管的选用19

3.3制水系统20

纯水和超纯水的定义20

国家标准实验用水20

水的纯化方法21

超纯水的制备22

3.4 PCR仪22

PCR技术原理22

PCR仪工作原理23

3.5凝胶成像系统23

3.6酶标仪24

3.7微量移液器26

微量移液器的一般使用步骤27

微量移液使用注意事项28

3.8 pH计28

PB-20酸度计的使用方法29

酸度计使用注意事项29

3.9生物安全柜30

3.10超净工作台30

3.11凝胶电泳系统31

电泳分类31

电泳仪的分类32

电泳槽的分类32

电泳仪的一般使用方法及注意事项33

3.12高压蒸汽灭菌器33

3.13液氮罐的使用34

思考题34

第4章 实验基本技能与实验室常规基础知识35

4.1常用器材的清洗处理35

常用器材的清洗35

常用洗涤液36

4.2实验用品及实验环境的消毒灭菌37

物理方法37

化学方法39

实验环境与其他污染物的消毒40

4.3细菌接种技术41

接种器具41

液体接种法41

平板接种法41

斜面接种法42

穿刺接种法42

4.4细菌培养基本技术42

细菌培养概述42

常用细菌培养基43

菌种的保存与复苏44

4.5细胞培养基本技术44

细胞培养的环境45

细胞培养的基本方法46

细胞计数及活力测定46

细胞的冻存及复苏47

体外培养细胞的分型47

培养细胞生命期48

体外培养细胞的种类和命名48

4.6实验材料的采集与处理49

血液样品49

细胞样品50

组织样品50

尿液样品51

4.7试剂及样品的保存51

试剂的保存51

核酸的保存53

酶的保存53

4.8溶液的混匀54

4.9实验室污染控制54

化学污染控制54

生物污染控制55

放射性污染控制55

锐器处理56

思考题56

下编 学生实验部分57

第5章 核酸分离纯化57

原理概述57

实验一 真核生物基因组DNA制备59

方案一 快速制备组织基因组DNA60

方案二 全血基因组DNA提取62

实验二 琼脂糖凝胶电泳65

实验三 总RNA的提取和电泳70

方案一 经典法（异硫氰酸胍-酸酚法）70

方案二 Trizol法72

实验四 RT-PCR75

一、逆转录（RT）75

二、PCR76

实验五 琼脂糖凝胶回收DNA片段83

思考题84

第6章 基因克隆85

6.1分子克隆策略85

原理概述85

实验六 体外重组：目的基因与载体的连接91

实验七 感受态细胞的制备及转化93

6.2重组体阳性克隆的筛选与鉴定95

原理概述95

实验八 重组质粒转化大肠杆菌的初步筛选98

实验九 质粒的小量制备100

实验十 限制性内切核酸酶的酶切与鉴定103

实验十一 重组子的原位杂交106

实验十二Southern印迹108

思考题111

第7章 基因表达112

7.1表达系统的选择112

原理概述112

实验十三 重组质粒在原核生物中的诱导表达115

7.2表达检测鉴定与蛋白纯化117

原理概述117

实验十四 蛋白质样品制备119

实验十五 蛋白质的定量121

实验十六SDS-PAGE蛋白质电泳124

实验十七 Western Blotting129

实验十八 免疫沉淀法检测表达蛋白132

实验十九 免疫荧光抗体法检测表达蛋白134

实验二十 免疫组化136

实验二十一 Ni2+柱亲和层析分离纯化带（His）6标签的重组蛋白139

思考题141

附录142

附录1核酸及蛋白质数据142

附录2分子克隆中常用缓冲液与试剂的配制145

附录3常用储存液的配制152

附录4细菌培养基与抗生素156

附录5常用酶的配制158

附录6溴化乙锭（EB）的净化和处理160

附录7常用试剂的作用原理162

附录8常用试剂与仪器供应商清单165

主要参考文献166