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第一篇 微生物学实验基本技术3

第一章 常用仪器及无菌室简介3

实验1 常用仪器及无菌室简介3

一、灭菌器3

二、滤菌器5

三、恒温箱（温箱）6

四、冰箱6

五、液氮罐6

六、恒温水浴箱（水浴箱）6

七、厌氧培养箱7

八、二氧化碳培养箱8

九、离心机8

十、普通光学显微镜（显微镜）9

十一、暗视野显微镜10

十二、荧光显微镜10

十三、医用净化工作台（超净工作台）11

十四、无菌室11

十五、微量可调移液器11

十七、电泳仪和电泳槽12

十六、PCR仪12

十八、紫外透射反射仪13

第二章 实验室常用器材的处理与消毒灭菌14

实验2 常用器材的处理与消毒灭菌14

一、常用玻璃器材的处理方法14

二、橡胶类制品的处理方法14

三、金属器械的处理法15

四、塑料及有机玻璃器械的处理法15

五、无菌室及其他污染物品的处理法15

六、常用器材的包装及灭菌16

第三章 常用细菌的染色技术17

实验3 细菌涂片的制作17

实验4 细菌染色的基本步骤17

实验5 美蓝染色法18

实验6 革兰染色法18

实验7 抗酸染色法19

实验8 金胺染色法20

实验9 奈瑟染色法20

实验12 芽胞染色法21

实验11 荚膜染色法21

实验10 细菌鞭毛染色 法21

实验13 细菌核质染色法22

实验14 细菌细胞壁染色法22

实验15 螺旋体改良镀银染色法22

第四章 细菌形态与结构的观察24

实验16 细菌基本形态的观察24

实验17 细菌基本结构的观察24

实验18 细菌特殊结构的观察24

实验20 细菌接种技术25

一、 接种器具25

第五章 细菌的人工培养法25

实验19 培养基的制备25

二、平板划线接种法26

三、 斜面培养基接种法26

四、液体培养基接种法26

五、半固体培养基接种法27

三、厌氧培养法28

二、二氧化碳培养法28

实验21 细菌的培养技术28

一、一般培养法28

实验22 细菌的生长情况观察29

一、液体培养基中生长情况观察29

二、半固体培养基中生长情况观察29

三、琼脂平板中生长情况观察29

实验24 IMViC实验30

一、靛基质试验（I）30

实验23 单糖发酵试验30

第六章 细菌生化鉴定法30

二、甲基红试验（M）31

三、VP（Voges-Proskauer）试验（Vi）31

四、枸橼酸盐（Citrate）利用试验（C）32

实验25 硫化氢试验32

实验26 脲酶试验32

实验27 数字编码鉴定法33

第七章 细菌血清学试验34

实验28 凝集试验34

一、玻片法凝集试验34

二、试管法凝集试验35

四、SPA协同凝集试验36

三、塑料板法肥达试验36

实验29 沉淀试验（毛细管法）37

实验30 荚膜肿胀试验38

第八章 理化及生物因素对细菌的影响39

实验31 紫外线对空气中微生物的杀灭作用39

实验32 煮沸对微生物的影响39

实验33 络合碘对皮肤的消毒作用39

一、痢疾杆菌噬菌体特异性试验40

实验36 噬菌体的特异性试验40

实验35 常用消毒剂的种类、用法和用途40

实验34 高压蒸气灭菌法的灭菌效果40

二、金黄色葡萄球菌噬菌体特异性试验41

实验37 细菌对抗菌药物的敏感性试验42

一、纸片扩散法42

二、稀释法44

三、E-test法药敏试验45

四、细菌L型变异46

三、鞭毛变异46

二、毒力变异46

一、光滑型与粗糙型菌落变异46

第九章 细菌的遗传与变异46

实验38 细菌变异现象的观察46

实验39 R质粒传递试验47

实验40 质粒DNA转化试验48

实验41 常见球菌的形态及染色性观察53

实验42 常见球菌的培养特性观察53

实验43 血标本的细菌学检查53

第十章 球菌53

第二篇 临床常见病原菌的培养与鉴定53

实验44 β-内酰胺酶的检测55

一、酸度法55

二、碘量法56

实验45 抗链球菌溶素“O”的检测56

一、ASO的溶血法检测56

二、抗链球菌溶素“O”胶乳法测定57

实验46 荧光抗体染色检测淋球菌57

实验48 肠杆菌科细菌的培养特性59

实验49 粪便标本的细菌学检查59

第十一章 肠杆菌科细菌59

实验47 肠杆菌科细菌的形态及染色性观察59

实验50 尿标本的定量培养法61

实验51 细菌内毒素的检测（鲎试验）62

第十二章 厌氧性细菌63

实验52 厌氧性细菌的形态及染色性观察63

实验53 厌氧性细菌的培养特性观察63

实验54 产气荚膜梭菌接种牛乳培养 基、葡萄糖高层琼脂方法64

实验55 产气荚膜梭菌的动物试验64

实验57 疑似白喉患者咽拭子的细菌学检查65

第十三章 棒状杆菌属65

实验56 棒状杆菌属的形态及染色性观察65

实验58 白喉杆菌毒力试验66

一、琼脂平板毒力试验（Elek平板毒力试验）66

二、动物试验66

第十四章 分枝杆菌属及需氧性放线索菌67

实验59 分枝杆菌属的形态及染色性观察67

实验60 结核杆菌的培养特性观察及与非结核分枝杆菌的区别68

实验61 结核病人痰标本抗酸染色68

实验62 ELISA 技术检测结核抗体——IgM69

实验63 ELISA技术检测结核抗体——IgG70

实验64 诺卡菌属71

第十五章 需氧芽胞杆菌72

实验65 炭疽杆菌与枯草杆菌的形态及染色性观察72

实验66 炭疽杆菌与枯草杆菌的培养特性观察72

实验67 炭疽杆菌串珠试验72

实验68 蜡样芽胞杆菌食物中毒的细菌学检查73

第十六章 霍乱弧菌、副溶血弧菌75

实验69 霍乱弧菌的鉴定75

实验70 副溶血性弧菌的鉴定76

实验71 空肠弯曲菌的鉴定79

第十七章 弯曲菌属、幽门螺杆菌、军团菌属79

实验72 幽门螺杆菌的鉴定80

实验73 军团菌的鉴定81

实验74 ELISA技术检测幽门螺杆菌IgM83

第十八章 微生物自动分析84

实验75 微生物自动分析的原理84

一、自动血培养检测及分析 系统的工作原理84

二、细菌自动鉴定及药敏系统84

实验76 大肠杆菌的自动分析仪分析85

实验79 钩体的显微镜凝集（显凝）试验88

实验78 钩体的动力检查——压滴法88

实验77 病原性螺旋体的形态及染争性观察88

第十九章 螺旋体88

实验80 梅毒螺旋 体血清学试验89

实验81 伯氏螺旋体的血清学试验91

第二十章 支原体92

实验82 肺炎支原体形态及菌落观察92

实验83 肺炎支原体冷凝集试验92

实验84 肺炎支原体IgM检测93

实验85 解脲脲原体脲酶试验94

实验87 荧光抗体法检测沙眼衣原体95

实验86 姬姆萨染色检查沙眼衣原体包涵体95

第二十一章 衣原体95

实验88 金标免疫斑点法检测沙眼衣原体抗体96

实验89 细胞培养分离衣原体96

第二十二章 立克次体98

实验90 恙虫病立克次体的形态观察98

实验91 外斐反应98

第二十三章 真菌100

实验92 真菌的基本形态及结构观察100

二、真菌小培养101

实验93 真菌的培养特性观察101

一、真菌大培养101

实验94 真菌的药敏试验102

实验95 常见浅部真菌的鉴定103

一、真菌皮屑的镜检103

二、毛发穿孔试验103

实验96 常见深部真菌的鉴定104

一、新生隐球菌的检验104

二、念珠菌的检验106

实验97 病毒包涵体观察111

实验98 病毒学实验中电子显微镜技术111

第三篇 病毒学实验111

第二十四章 病毒形态结构观察111

第二十五章 病毒的分离培养技术114

实验99 病毒的动物接种法114

实验100 病毒的鸡胚接种法114

一、鸡胚的孵育及检查114

二、病毒的接种途径115

四、病毒的收获116

三、培养及观察116

实验101 病毒的组织培养法117

一、细胞培养法117

二、病毒接种法及细胞病变观察118

第二十六章 病毒数量与感染性的测定119

实验102 蚀斑试验119

实验103 TCID50测定119

第二十七章 呼吸道病毒121

实验104 流感病毒的分离与鉴定121

实验105 ELISA技术检测流感 病毒IgM123

实验106 ELISA技术检测腮腺炎病毒IgM124

实验107 ELISA技术检测麻疹病毒IgM125

实验108 ELISA技术检测呼吸道合胞病毒IgM126

实验109 ELISA技术测定风疹病毒IgM127

第二十八章 肠道病毒129

实验100 肠道病毒的分离鉴定129

实验111 轮状病毒的检测130

一、免疫电镀技术130

二、ELISA间接双抗 体夹心法130

实验112 ILISA检测CSV3IgM抗体131

三、轮状病毒 抗原的快速一步法检测131

第二十九章 肝炎病毒133

实验113 ELISA技术检测甲型肝炎病毒IgM133

实验114 反向间接血凝法（RPHA）检测HbsAg134

实验115 ELISA技术检测HbsAg134

实验116 ELISA检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM135

实验117 ELISA技术检测HBeAb136

实验118 ELISA技术检测HCV-IgM137

实验119 ELISA技术测检HEV- IgG138

实验120 ELISA技术快速检测HV-IgM139

实验121 ELISA技术检测HGV- IgG140

第三十章 人类免疫缺陷病毒141

实验122 ELISA技术检测HIV抗体141

实验123 斑点免疫法检测HIV（1/2型）142

实验124 HIV抗体确证试验——WB法143

第三十一章 出血热病毒145

实验125 免疫荧光法检测汉坦病毒IgM145

实验126 ELISA技术检测汉坦病毒特异性IgM146

实验128 ELISA检测抗HSV-1 IgM147

实验127 免疫荧光技术检测HCMV147

第三十二章 疱疹病毒147

实验129 ELISA技术检测HCMV IgM148

实验130 ELISA技术检测EB病毒核抗原（EB—NA）IgM149

第四篇 微生物学动物实验153

第三十三章 动物实验的基本知识和技术153

实验131 实验动物的管理、选择及其抓取固定方法153

一、实验动物的管理153

二、实验动物的选择153

三、实验动物的抓取固定方法153

一、动物接种技术155

实验132 动物接种与采血技术155

二、动物采血技术156

第三十四章 微生物学动物实验157

实验133 免疫血清的制备157

一、动物的选择与准备157

二、抗原的制备157

三、注射方法及免疫血清的采取157

一、 破伤风痉挛毒素的检测158

实验135 体内法细菌外毒素的检测158

实验134 感染动物尸体解剖观察及细菌学检查法158

四、血清的处理与保存158

二、大肠杆菌耐热肠毒素（ST）的检测159

三、白喉杆菌毒力试验159

实验136 检测细菌致病性的动物实验160

一、 产气英膜梭菌的动物实验160

二、副溶血性弧菌的毒力试验160

三、蜡样芽胞杆菌毒力试验161

实验137 细菌的毒力变异161

实验138 DNA的提取165

一、酚—氯仿—异戊醇法165

第五篇 分子微生物学试验165

第三十五章 分子微生物学实验基本技术165

二、快速法166

实验139 RNA的提取166

实验140 DNA凝胶电泳167

第三十六章 部分病原微生物的分子生物学检测169

实验141 PCR技术检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）mes A基因169

实验143 PCR法检测HBV170

实验142 PCR技术检测淋球菌170

实验144 斑点杂交法检测HBV—DNA171

实验145 RT—PCR技术检测HCV RNA173

实验146 PCR法检测HCMV174

实验147 PCR微板核酸杂 交ELISA检测沙眼衣原体DNA175

实验148 PCR微板核酸杂交EISA检测TB176

实验149 物体表面的检测181

一、经典方法181

实验150 医护人员手检测181

第三十七章 医院感染的微生物学检测181

第六篇 医院内感染的微生物学检测181

二、细菌定量采样皿法182

实验151 空气监测182

实验152 血透液的监测183

实验153 消毒液监测183

实验154 无菌器材、一次性注射用品监测184

实验155 输注用液中细菌内毒素的监测184

一、生活饮用水的检验187

实验157 细菌总数的测定187

实验156 水卫生细菌学检测的水样采集187

第七篇 卫生细菌学检查187

第三十八章 饮用水的卫生细菌学检测187

二、 水源水的检验188

实验158 大肠菌群的测定189

一、发酵法189

二、滤膜法190

实验159 大肠菌群的一步法测定192

实验160 细菌总数的测定193

实验161 大肠菌群的检验193

第三十九章 食品卫生细菌学检测193

实验162 粪大肠菌群的检验195

实验163 奶粉中金黄色葡萄球菌的检验195

第四十章 空气的卫生细菌学检验198

实验164 细菌总数的测定198

一、沉降法198

二、滤过法198

实验165 空气中链球菌检查法199

附录1：常用试剂的配制201

附录2：常用培养基的配制205

参考书目213