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第1章　人晶状体上皮细胞的培养1

1 引言1

2　材料1

3　方法2

3.1　外植体培养2

3.2　收集细胞3

3.3　细胞传代3

3.4　细胞冻存3

3.5　细胞运输3

4　注意事项4

参考文献5

1 引言6

第2章　人导气管上皮细胞的培养6

2　材料7

2.1　培养器皿的包被7

2.2　人气管上皮细胞的培养7

2.3　人气管黏膜下层腺体的培养8

3　方法9

3.1　培养器皿的包被9

3.2　人气管上皮细胞的培养9

3.3　人气管黏膜下层腺细胞的培养10

参考文献12

第3章　大鼠胃黏膜上皮细胞的培养13

1 引言13

1.1　新生大鼠胃上皮细胞原代培养13

3.1　新生大鼠胃上皮细胞原代培养14

3　方法14

2　材料14

2.2　成年大鼠胃上皮细胞原代培养14

2.1　新生大鼠胃上皮细胞原代培养14

3.2　成年大鼠胃上皮细胞原代培养15

3.3　源自大鼠胃的非转化上皮细胞系15

3.4　源自小鼠胃的非转化上皮细胞系16

4　注意事项17

参考文献17

第4章　胸腺上皮细胞的培养19

1 引言19

2　材料19

2.1 新生小鼠胸腺上皮细胞的无血清培养19

2.2　胎鼠胸腺上皮细胞无血清培养20

2.3　人胸腺上皮细胞的无血清培养21

3　方法21

3.1　新生小鼠胸腺上皮细胞无血清培养21

3.2　胎鼠胸腺上皮细胞的无血清培养22

3.3　人胸腺上皮细胞的无血清培养23

4　注意事项24

参考文献25

第5章　胆管上皮细胞的培养26

1 引言26

2　材料26

2.1 胆管结扎大鼠非转化性高度分化的胆管上皮细胞的分离和培养26

2.2　基质28

2.3　胆管结扎／呋喃处理大鼠非转化性高度分化的胆管上皮的分离和培养29

3　实验方法30

3.1 胆管结扎大鼠肝脏非转化性高度分化的胆管上皮细胞的分离培养30

3.2　胆管结扎／呋喃饲喂大鼠非转化性高度分化的胆管上皮细胞的分离培养33

3.3　从呋喃诱导的转移性胆管瘤建立一个新的大鼠胆管瘤细胞系34

4　注意事项34

参考文献35

第6章　肝脏上皮细胞的培养37

1 引言37

2　材料37

3　方法38

3.1　从新生大鼠肝脏中分离细胞38

3.2　从成年大鼠肝脏中分离细胞39

3.3　肝脏上皮细胞的克隆40

3.4　培养41

3.5　肝脏上皮细胞的保存41

4　注意事项42

参考文献43

第7章　肺上皮细胞的培养45

1 引言45

1.1 背景45

2　材料48

2.1　Ⅱ型肺泡细胞的分离48

2.2　Ⅱ型肺泡细胞的纯化48

2.3　类Ⅰ型肺泡细胞表型的培养48

3.2　Ⅱ型肺泡细胞的纯化49

3　方法49

3.1　Ⅱ型肺泡细胞的分离49

3.3　类Ⅰ型肺泡细胞表型的培养50

4　注意事项50

参考文献52

第8章　前列腺上皮细胞的分离和培养53

1 引言53

2　材料54

3　方法55

3.1　组织的获得55

3.2　组织的准备和消化55

3.3　培养板中类器官的培养56

4　注意事项57

3.4　单细胞悬液的平板培养57

参考文献58

第9章　牛乳腺内皮／上皮细胞血／奶屏障的培养模型59

1 引言59

2　材料59

2.1 内皮细胞的分离和培养59

2.2　上皮细胞的分离60

2.3　细胞的冻存和解冻61

2.4　上皮细胞培养61

2.5　免疫组织化学62

2.6　细胞培养模型的准备62

3.1　内皮细胞分离63

3　方法63

3.2　上皮细胞分离65

3.3　细胞的冻存和解冻66

3.4　上皮细胞培养67

3.5　免疫细胞化学67

3.6　细胞培养模型的制备68

4　注意事项68

参考文献70

第10章　血液-脑脊液屏障的培养——脉络上皮细胞原代培养和跨上皮转运模式72

1　引言72

2.3　细胞原代培养73

2.2　组织分离73

2.1　培养皿的包被73

2　材料73

2.4　二室跨上皮模型74

2.5　免疫细胞化学研究74

2.6　RT-PCR75

3　方法75

3.1　培养皿的包被75

3.2　组织分离76

3.3　原代细胞培养77

3.4　双室跨上皮模型79

3.5　免疫细胞化学研究79

3.6　RT-PCR分析80

4　注意事项82

参考文献84

第11章　分化的人导气管上皮细胞原代培养模型85

1 引言85

1.1　导气管上皮85

1.2　分化的人导气管上皮原代培养的形态85

1.3　分化的导气管上皮原代培养的用途87

1.4　人导气管上皮原代培养的发展89

2　材料90

3　方法92

3.1　人导气管组织的收集和分离92

3.2　分离和收集92

3.3　底物的准备93

3.4　在膜上接种细胞94

3.5　常规培养与长期维持95

3.6　导气管上皮的评价96

4　注意事项99

参考文献100

第12章　小鼠角质细胞的原代培养101

1 引言101

2　材料101

3　方法102

3.1　准备胶原包被的培养皿102

3.2　准备角质细胞培养103

4　注意事项104

参考文献104

1 引言106

第13章　培养的上皮细胞的凋亡分析106

2　材料107

2.1 通过检测caspase 3的激活和细胞核形分析确定贴壁细胞的凋亡107

2.2　通过免疫组织化学计数脱落的凋亡细胞107

2.3　通过检测annexin V分析细胞膜的极性107

2.4　分离贴壁细胞的细胞质和线粒体108

2.5　通过免疫组织化学检测Bax活性——向线粒体的转位108

3　方法108

3.1　通过检测caspase 3的激活和细胞核形分析确定贴壁细胞的凋亡108

3.2　通过免疫组织化学计数脱落的凋亡细胞110

3.3　通过检测annexin V分析细胞膜的极性110

3.4　分离贴壁细胞的细胞质和线粒体110

4　注意事项111

3.5　通过免疫组织化学检测Bax活性——向线粒体的转位111

参考文献113

第14章　上皮细胞的标志——角蛋白114

1 引言114

2　材料116

3　方法117

3.1 生长在盖玻片上的上皮细胞固定及渗透处理117

3.2　细胞角蛋白免疫细胞化学染色117

3.3　细胞角蛋白的免疫荧光染色118

3.4　细胞多种角蛋白的同时免疫荧光染色118

4　注意事项118

参考文献120

2　材料122

第15章　上皮细胞的整联蛋白122

1 引言122

3　方法123

3.1　进行显微观察的细胞传代培养123

3.2　检测非渗透细胞中整联蛋白的细胞准备124

3.3　检测可渗透细胞中整联蛋白的细胞准备124

3.4　与侧面整联蛋白的接触125

3.5　整联蛋白表达的定量分析125

3.6　激光共聚焦显微镜126

3.7　流式细胞计数法126

4　注意事项127

参考文献128

2　材料129

2.1　溶液129

1　引言129

第16章　人类正常表皮角质细胞在无血清培养系统中的分离、培养和分化129

2.2　设备130

3　方法130

3.1　皮肤的准备130

3.2　人表皮角质细胞的分离130

3.3　人表皮角质细胞的传代131

3.4　将具有高增殖潜能的正常人类表皮角质细胞分化为重建表皮131

4　注意事项131

参考文献132

2.3　外科手术134

2.1 患者134

2.2　人类表皮细胞培养134

1 引言134

第17章　临床应用培养的自体上皮细胞治疗烧伤和皮肤表面毁损134

2　材料和方法134

2.4　组织学检查135

3　结果135

3.1　培养的上皮细胞135

3.2　移植物的接受136

3.3　手术结果136

4　注意事项140

参考文献141

第18章　培养上皮细胞的移植142

1 引言142

3.1　培养上皮的准备143

2　材料143

3　方法143

3.2　移植物的准备145

3.3　冷冻与解冻技术145

3.4　患者145

3.5　培养上皮的移植146

4　注意事项147

参考文献151

第19章　正常人类上皮的扩展培养体系——一个研究细胞迁移与增殖协同性的体外模型153

1 引言153

3.1　准备培养皿154

3　方法154

2.3　培养液154

2.2　工具和塑料器皿154

2.1　正常人组织154

2　材料154

3.2　准备样品155

3.3　扩展培养155

4　注意事项155

参考文献156

第20章　上皮细胞培养在呼吸道药物转运研究中的应用157

1 引言157

2　材料157

3　方法159

3.1　气管上皮细胞培养159

3.2　肺泡上皮细胞培养160

3.3　培养的上皮细胞单层用于研究药物转运161

3.4　数据分析和计算162

4　注意事项165

参考文献167

第21章　上皮细胞培养物在药物转运研究中的应用169

1 引言169

2　材料169

2.1　细胞169

2.2　仪器和消耗品170

2.3　化学药品和缓冲液172

2.4　药物174

3　方法174

3.1　在透性支持物上培养上皮细胞174

3.2　上皮细胞单层的特性176

3.3　药物转运研究179

3.4　计算184

4　注意事项192

参考文献194

第22章　培养上皮细胞的X射线显微分析197

1 引言197

2　材料200

2.1　X射线显微分析培养细胞的冰冻切片200

2.2　X射线显微分析培养在固体基质上的细胞200

2.3　X射线显微分析培养在滤网膜上细胞201

2.4　X射线显微分析分离的人鼻腔上皮细胞201

2.5　供应商201

3.1　培养细胞冷冻切片的X射线显微分析202

3　方法202

3.2　培养在固体支持物上细胞的X射线显微分析203

3.3　在滤网薄膜上培养的细胞的X射线显微分析204

3.4　分离的人鼻腔上皮细胞的X射线显微分析205

4　注意事项206

参考文献208

第23章　ENU诱导大鼠乳腺上皮细胞突变210

1 引言210

2　材料210

2.1　细胞的来源与分离210

2.6　染色体分析211

2.5　细胞计数211

2.4　DNA合成211

2.2　致癌物质脉冲211

2.3　流式细胞仪测定细胞DNA含量211

2.7　克隆形成212

2.8　肿瘤生成212

2.9　组织学212

2.10　支原体检测212

3　方法212

3.1　细胞的来源与分离212

3.2　注入致癌物质212

3.3　细胞DNA含量的流式细胞仪检测214

3.4　DNA合成214

3.7　在半固体琼脂培养基中克隆及克隆形成215

3.8　肿瘤形成215

3.6　染色体分析215

3.5　细胞计数215

3.9　组织学216

3.10　支原体检测216

3.11　统计分析216

4　注意事项216

参考文献217

第24章　ENU诱导的卵巢癌219

1　引言219

2　材料219

2.1　动物与处理219

2.2　细胞培养物的分离219

3　方法220

2.6　致癌性220

3.1　动物与处理220

2.3　流式细胞仪分析DNA分布220

2.5　锚定依赖生长220

2.4　染色体分析220

3.2　细胞培养物的分离221

3.3　DNA分布的流式细胞仪分析222

3.4　染色体分析222

3.5　非锚定依赖生长222

3.6　致癌性223

3.7　形态学研究225

4　注意事项225

参考文献226

第25章　上皮细胞单层膜电容的测量227

1　引言227

1.1　阻抗分析理论228

1.2　实际阻抗分析229

2　材料229

2.1　基本的电生理设备229

2.2　电阻数据的获得230

2.3　电阻数据分析230

3　方法231

3.1　预备试验231

3.2　收集数据232

3.3　参数评估232

4　注意事项233

参考文献234

2　材料236

第26章　应用光谱学评估上皮细胞融合236

1　引言236

2.1　细胞培养237

3　方法238

3.1　细胞培养238

3.2　酚红的流量和通透性238

4　注意事项241

参考文献241

第27章　肝脏上皮细胞和肝脏细胞的共培养242

1　引言242

2　材料242

2.1　大鼠肝脏细胞的分离242

3　方法243

3.1　大鼠肝脏细胞的分离243

2.2　共培养的准备243

2.3　共培养糖原的染色243

3.2　共培养的准备244

3.3　共培养的糖原染色245

4　注意事项245

参考文献248

第28章 内皮细胞与血管平滑肌细胞的共培养及由细胞内钙介导的胞间对话250

1　引言250

2　材料250

2.1　VSMC的分离250

2.4　用二维图像分析系统对Ca2＋进行测定251

2.3　EC和VSMC的共培养251

2.2　牛腹主动脉EC的原代培养251

2.5　试剂应用的方案举例252

3　方法252

3.1 VSMC的分离252

3.2　牛腹主动脉EC的原代培养253

3.3　EC和VSMC的共培养253

3.4　用二维图像分析系统对Ca2＋进行测定254

3.5　试剂应用的方案举例254

4　注意事项256

参考文献257

第29章　建立免疫细胞与上皮细胞共培养体系258

1　引言258

2.2　细胞培养259

2.3　血液免疫细胞的分离和激活259

2　材料259

2.1 上皮细胞259

2.4　主要的仪器260

3　方法260

3.1　上皮细胞培养260

3.2　血液免疫细胞的分离261

3.3　上皮细胞与免疫细胞共培养及免疫激活262

3.4　通过Ussing小室分析上皮细胞离子的转移及渗透性263

4　注意事项264

参考文献266

2.1　试剂268

2　材料268

1　引言268

第30章　胚胎上皮细胞的外植体培养268

2.2　取材与培养269

3　方法270

3.1　磁珠处理270

3.2　细胞聚集物的准备271

3.3　组织培养皿的处理271

3.4　组织的分离271

3.5　培养与固定272

4　注意事项273

参考文献274

2　材料275

2.1　上皮细胞与细菌的培养275

1 引言275

第31章　细菌与宿主上皮在体外的相互作用275

2.2　上皮细胞的形态与功能的分析277

2.3　上皮细胞的凋亡278

2.4　主要设备279

3　方法279

3.1　上皮细胞和细菌的生长279

3.2　上皮细胞的形态和功能的分析281

3.3　上皮细胞的凋亡283

4　注意事项285

参考文献287

索引289