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上篇 DNA扩增技术3

第一章 DNA的性质3

第一节 DNA的理化性质4

一、DNA的紫外吸收4

二、DNA的沉降特性6

三、DNA的变性与复性7

第二节 DNA的复制11

一、DNA复制的基本特点11

二、DNA复制中的酶和蛋白因子12

三、DNA复制过程20

四、DNA的损伤与修复21

第二章 DNA扩增常用的克隆载体26

第一节 质粒27

第二节 噬菌体载体30

一、？噬菌体载体31

二、单链噬菌体载体33

三、粘性质粒载体35

第三节 动物病毒载体35

一、SV40载体36

二、痘苗病毒载体37

第四节 细菌菌株38

一、细菌菌株的生长和保存39

二、细菌菌株40

第三章 DNA扩增——PCR技术42

第一节 DNA的一般制备与扩增技术概述43

一、DNA的一般制备方法43

二、DNA的传统扩增技术44

一、PCR基本原理51

第二节 PCR原理与特点51

二、PCR的特点53

第三节 Taq DNA聚合酶54

一、Taq聚合酶的性质55

二、影响酶活性的因素58

第四节 PCR基本技术61

一、设备与试剂61

二、模板DNA提取方法64

三、PCR反应体系69

四、PCR操作步骤69

第五节 PCR具体实施中的有关问题71

一、模板选择71

二、引物的设计与合成72

三、引物合成后的处理73

四、引物的纯化74

五、Mg2+浓度的影响79

六、dNTP的浓度79

七、循环参数79

八、扩增平台期81

九、标本的污染和假阳性的出现81

第六节 DNA扩增仪及基因诊断技术自动化模式83

一、DNA扩增仪83

二、基因诊断技术自动化模式87

第七节 PCR试剂盒88

一、美国PE公司试剂盒89

二、济南军区总医院HPV1？、HPV1？试剂盒90

第一节 琼脂糖凝胶电泳95

一、琼脂糖凝胶的制备95

第四章 DNA扩增产物的常用检测方法95

二、琼脂糖凝胶中DNA的染色与脱色100

三、微型凝胶电泳101

四、酶切DNA片段的琼脂糖凝胶电泳101

五、从琼脂糖凝胶中回收DNA105

六、碱性琼脂糖凝胶电泳109

七、脉冲电场凝胶电泳110

八、Southern吸印法113

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳116

一、凝胶聚合原理117

二、垂直板型电泳118

三、从聚丙烯酰胺凝胶中分离DNA片段123

四、酶切后DNA片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析124

一、聚丙烯酰胺凝胶分离链126

第三节 分离链的凝胶电泳126

二、琼脂糖凝胶分离链128

三、变性梯度凝胶电泳130

第四节 离子交换层析技术134

一、离子交换剂种类135

二、操作步骤136

第五节 用标记探针检测DNA140

一、探针的选择140

二、探针的末端标记142

三、标记的探针杂交143

四、斑点杂交检测DNA扩增产物146

第六节 PCR扩增产物的直接测序148

一、化学断裂法149

二、Taq DNA聚合酶直接测序150

三、三引物法152

四、不对称PCR制备单链模板DNA测序153

五、GAWTS法155

六、测序反应的自动化155

七、高效液相色谱法（HPLC）157

第七节 DNA酶免疫试验157

一、DEIA的基本原理158

二、DEIA的特异性与敏感性159

三、PCR—DEIA操作方法163

第五章 PCR技术进展167

第一节 固定PCR167

第二节 重组PCR168

第三节 引物标记PCR171

一、DNA—PCR定量174

第四节 定量PCR174

二、mRNA-PCR定量175

第五节 反向PCR179

第六节 逆转录PCR182

一、cDNA的合成182

二、灭活逆转录酶183

三、PCR183

四、产物分析184

第七节 竞争性PCR184

一、引物竞争PCR184

二、模板竞争PCR186

第八节 多重引物PCR188

第九节 等位特异PCR189

第十节 简并引物PCR191

二、错误配对PCR193

第十一节 其他衍生的PCR技术193

一、加端PCR193

三、一步扩增法194

四、体外转录放大系统195

五、Qβ复制酶系统197

六、 套式”PCR197

七、不完全配对PCR198

八、PCR—单链构型多态性分析199

第六章 常用的试剂和基本技术202

第一节 试剂的配制202

一、有机试剂的配制202

二、缓冲液和溶液的配制202

三、抗生素的配制207

五、常用凝胶载样缓冲液的配制208

四、部分酶的配制208

第二节 基本技术209

一、玻璃与塑料器皿的处理209

二、透析袋的制备210

三、塑料袋封口210

四、DNA抽提及沉淀210

五、放射自显影及凝胶拍照212

六、限制性内切酶及其应用215

七、DNA含量测定220

八、核酸保存技术222

九、实验室安全223

下篇 DNA扩增的医学应用229

第七章 病原体DNA的检测229

第一节 PCR在病毒学领域中的应用230

一、乙型肝炎病毒234

二、人乳头瘤病毒256

三、丙型肝炎病毒274

四、人巨细胞病毒282

五、人免疫缺陷病毒286

六、EB病毒293

七、腮腺炎病毒297

第二节 PCR在检测细菌中的应用299

一、VT毒素大肠杆菌299

二、痢疾性腹泻病原菌300

三、结核杆菌及其他分枝杆菌304

第三节 其他病原微生物310

一、沙眼衣原体310

二、肺炎支原体313

三、立克次体315

第八章 DNA扩增技术在免疫学中的应用324

第一节 细胞因子324

一、检测通则327

二、IL-2327

三、IL-3330

四、IL-4334

五、IL-6338

六、其他细胞因子340

第二节 HLA基因分型346

一、HLA基因结构简述346

二、HLA-D区基因的特点347

三、HLA-D区基因的PCR扩增检测348

四、HLA配型在器官移植中的意义及发展趋势352

一、T细胞受体357

第三节 T细胞受体、免疫球蛋白及补体的研究357

二、免疫球蛋白及补体366

第四节 自身免疫性疾病369

一、自身免疫性肝炎370

二、风湿性关节炎372

第九章 肿瘤相关基因的检测377

第一节 原癌基因与癌基因378

一、常见原癌基因、癌基因的特点382

二、原癌基因、癌基因的激活方式386

第二节 原癌基因、癌基因的一般检测方法389

一、DNA转染实验389

二、分子生物学与免疫学检测391

第三节 原癌基因、癌基因的PCR检测393

一、PCR检测的范围及特点393

二、ras基因点突变的PCR检测396

第四节 原癌基因、癌基因与恶性肿瘤406

一、胃癌407

二、肺癌408

三、乳腺癌409

四、结肠癌、直肠癌411

五、宫颈癌412

六、血液系统恶性肿癌413

七、其他恶性肿瘤414

第五节 抗癌基因416

一、抗癌基因的生物学功能417

二、抗癌基因的检测419

三、Rb基因421

四、P53抗癌基因427

五、其他抗癌基因443

第六节 原癌基因与心脑血管疾病445

一、癌基因与高血压446

二、癌基因与心肌肥厚448

三、癌基因与动脉粥样硬化451

第七节 其他肿瘤相关基因453

一、慢粒白血病bcr-abl嵌合基因mRNA的PCR检测453

二、B淋巴细胞瘤染色体重排455

第十章 遗传病相关基因检测460

第一节 地中海贫血的基因诊断460

第二节 杜氏肌营养不良症465

第三节 甲型血友病468

第四节 苯丙酮尿症470

第五节 性连锁鱼鳞病471

第六节 Leber s视神经病473

第七节 自毁容貌综合征475

第八节 胎儿产前性别鉴定476

第十一章 分子生物学及法医学应用480

第一节 基因分离和基因表达的检测480

一、基因分离480

二、基因表达482

第二节 突变体和重组体的构建483

一、突变体的构建484

二、重组体的构建485

第三节 法医学应用488

一、个体识别488

二、性别鉴定492

三、血缘关系的确定494