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第一章　细胞培养概述1

一、细胞培养发展简史1

二、细胞培养的基本概念3

三、细胞培养实验的基本要求4

第二章　细胞培养准备技术6

第一节　实验器材清洗、包装和消毒6

一、常用的实验器材6

二、清洗7

三、包装10

四、消毒12

第二节　实验室常用的仪器设备使用和维护18

一、净化台18

二、自动双重纯水蒸馏器19

三、抽气泵20

四、压力蒸汽消毒器21

五、电热恒温培养箱22

六、电热恒温干燥箱22

七、液氮生物容器23

八、CO2培养箱24

九、冰箱27

第三节　动物细胞用液制备27

一、蒸馏水27

二、平衡盐溶液28

三、天然培养基30

四、合成培养基32

五、血清细胞培养基38

六、无血清细胞培养基39

七、消化液44

十一、20mmol/LL－谷氨酰胺46

十、pH调整液46

九、蛋白酶抑制剂46

八、稳定剂46

十二、抗菌素液47

十三、细胞用液的分装方法和要求48

思考题50

第三章　细胞培养基本技术52

第一节　细胞原代培养52

一、乳鼠肺组织原代培养程序52

二、原代细胞实验操作要领55

三、原代细胞实验注意事项56

四、原代细胞实验取材57

五、原代细胞培养方法介绍61

第二节　培养细胞的观察67

一、培养细胞分型67

二、细胞培养中的常用术语69

三、培养细胞一代生长过程70

四、细胞周期77

五、培养细胞的生命期78

第三节　培养细胞常规检查和生物学检测81

一、培养细胞常规检查81

二、培养细胞的生物学检查和鉴定87

第四节　细胞传代培养91

一、细胞传代方法91

二、乳鼠原代肺细胞培养物传代92

三、盖玻片条细胞培养法94

四、死、活细胞鉴别试验95

第五节　细胞冻存、复苏、运输和短期保存97

一、影响冻存细胞活性的因素97

二、细胞冻存方法98

四、细胞复苏方法101

三、组织细胞短期保存方法101

五、细胞运输102

六、引进细胞的方法102

思考题103

第四章　细胞培养研究技术104

第一节　细胞的分离和纯化104

一、成纤维细胞的分离和去除104

二、骨髓和外周血有核细胞的纯化107

三、肿瘤细胞的分离纯化108

四、单核细胞和巨噬细胞的纯化110

五、上皮细胞的纯化111

六、细胞移速分离纯化112

第二节　培养细胞活力检测方法112

一、细胞克隆形成试验112

二、细胞活性染色法117

三、细胞四唑盐比色法119

第三节　细胞形态学研究方法120

一、培养细胞的固定120

二、培养细胞常用染色法123

三、细胞免疫化学染色129

四、培养细胞透射电镜样品的制备138

五、培养细胞扫描电镜样品的制备139

第四节　细胞遗传学的检测方法140

一、细胞DNA定量的测定140

二、细胞DNA合成的测定142

三、细胞DNA双参数的测定145

四、人体外周血淋巴细胞染色体标本的制备146

五、培养细胞染色体标本的制备147

六、染色体G显带148

七、姐妹染色单体区分染色法155

第五节　显微摄影技术157

一、显微镜的光学部件和显微照相操作157

二、相差显微镜175

三、荧光显微镜179

第五章　原代细胞培养和分析185

第一节　SD乳鼠心肌细胞的分离培养185

一、准备185

二、心肌细胞的分离培养185

三、原代心肌细胞生长观察186

四、讨论189

第二节　大鼠血管平滑肌细胞的分离培养190

一、准备190

二、取材190

四、原代血管平滑肌细胞生长观察191

三、血管平滑肌细胞的分离培养191

五、讨论192

第三节　成人前脂肪细胞的分离培养193

一、准备193

二、前脂肪细胞的分离培养194

三、原代前脂肪细胞生长观察194

四、讨论196

第四节　大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养196

一、准备196

二、肺微血管内皮细胞的分离培养196

三、原代肺微血管内皮细胞生长观察197

四、讨论199

附录一　国内外细胞库200

附录二　动物常用的细胞注射技术202

参考文献206