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绪论1

上篇　热带植物基因工程原理第1章　基因工程载体和工具酶15

1.1　基因工程载体15

1.2　植物基因工程载体32

1.3　人工染色体载体42

1.4　工具酶45

第2章 目的基因的分离与克隆57

2.1 目的基因57

2.2 目的基因的分离与克隆57

第3章　基因重组和基因工程101

3.1 自然界的基因转移和重组101

3.2　基因概念的认知107

3.3　基因组学108

3.4　基因重组111

第4章 目的基因的转化128

4.1　重组DNA分子转入原核生物细胞128

4.2　重组DNA分子转入植物细胞131

第5章　重组体的筛选与鉴定153

5.1　遗传标记表型特征筛选法153

5.2　重组子结构特征筛选法156

5.3　核酸分子杂交检测法167

5.4 目的基因定位检测法176

5.5　转基因植物的检测与鉴定179

第6章　外源基因的表达与调控192

6.1　基因的表达与调控概述192

6.2　外源基因的瞬时表达和稳定表达200

6.3　原核生物的基因表达与调控201

6.4　真核生物的基因表达与调控206

第7章　植物基因工程研究进展218

7.1　转基因植物发展现状218

7.2　转基因植物的应用225

7.3　转基因植物的安全性评价230

下篇　热带植物基因工程操作技术第8章 目的基因克隆与功能分析239

8.1　聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术239

8.2　RT-PCR技术240

8.3 mRNA差别显示法242

8.4　抑制消减杂交法248

8.5　cDNA微列阵分析技术255

8.6　RACE技术259

8.7　T-DNA插入突变技术263

8.8　酵母双杂交技术268

8.9　宏基因组文库构建270

8.10　cDNA代表性差异分析274

8.11　基因组文库的构建278

8.12　cDNA文库构建290

8.13　扣除杂交法294

8.14　限制酶介导整合技术296

8.15　实时荧光PCR298

8.16　图位克隆分离目的基因300

8.17　转座子标签技术304

8.18　热不对称性交互PCR（Tail-PCR）307

8.19　反向PCR（Inverse PCR,iPCR）311

8.20　染色体步移法314

8.21 电子克隆（in silico cloning）318

8.22　基因互补技术320

8.23　基因敲除技术321

8.24　RNA干扰技术325

第9章　热带植物基因组核酸制备334

9.1　细菌基因组DNA提取334

9.2　细菌基因组RNA提取334

9.3　真菌基因组DNA提取334

9.4　真菌基因组RNA提取334

9.5　热带植物土壤基因组DNA制备335

9.6　质粒DNA提取335

9.7　橡胶树叶片基因组总DNA提取337

9.8　橡胶树叶片和茎基因组总RNA提取338

9.9　橡胶树胶乳基因组总RNA提取339

9.10　橡胶树树皮基因组总RNA提取339

9.11　香蕉基因组总DNA提取339

9.12　香蕉基因组总RNA提取339

9.13　杧果基因组总DNA提取340

9.14　杧果基因组总RNA提取341

9.15　荔枝基因组总DNA提取342

9.16　无核荔枝胚胎总RNA提取342

9.17　龙眼基因组总DNA提取344

9.18　龙眼基因组总RNA提取344

9.19　番木瓜基因组总DNA提取345

9.20　番木瓜基因组总RNA提取346

9.21 马槟榔叶片基因组总DNA提取346

9.22　马槟榔种仁基因组总RNA提取347

9.23　木薯基因组总DNA提取348

9.24　木薯基因组总RNA提取349

9.25　甘蔗基因组总DNA提取349

9.26　甘蔗基因组总RNA提取350

9.27　油棕叶片基因组总DNA提取350

9.28　水稻基因组总DNA提取351

9.29　水稻基因组总RNA提取352

第10章　热带植物基因工程受体系统建立353

10.1　橡胶（Hevea basiliensis Muell.Arg.）组织培养353

10.2　蓝桉（Eucalyptus globulus Labill.）组织培养354

10.3　胡椒（Piper nigrum L.）组织培养355

10.4 咖啡（Coffea spp.）组织培养356

10.5　香蕉（Musa nana Lour.）组织培养356

10.6　杧果（Mangifera indica L.）组织培养357

10.7　荔枝（Litchi chinensis Sonn.）组织培养358

10.8　龙眼（Dimocarpus longan Lour.）组织培养359

10.9　椰子（Cocos nucifera L.）组织培养360

10.10　木薯（Manihot esculenta Crantz）组织培养361

10.11　甘蔗（Saccharum sirense Roxb.）组织培养362

10.12　牧草（Grazing breeding）组织培养363

10.13　笔花豆（Stylosanthes spp.）组织培养364

10.14　益智（Alpinia oxyphylla Miq.）组织培养365

10.15　砂仁（Amomum villosum Lour.）组织培养365

10.16　白豆蔻Amomum kravanh Pierre ex Cagnep.）组织培养366

10.17　长春花［Catharanhus roseus(L.)G.Don］组织培养367

10.18　海南粗榧（Cephalotaxus hainanensis Li）组织培养368

10.19　海南猫须草［Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu］组织培养369

10.20　海南龙血树（Dracaena cambodiana Pierre ex Cagnep.）组织培养370

10.21　蝴蝶兰（Phalaenopsis hybrid.）组织培养371

10.22　水稻（Oryza sativa L.）组织培养372

第11章　热带植物基因工程转化技术373

11.1　Cohen转化法373

11.2　电转化法374

11.3　原生质体转化法（CryK13V基因对绿色木霉原生质体的转化）375

11.4　转染377

11.5　转导378

11.6　根癌农杆菌Ti质粒转化系统379

11.7 发根农杆菌Ri质粒载体基因转化（发根农杆菌介导的茶树遗传转化）383

11.8　植物病毒载体介导基因转化（植物病毒载体介导的蚕豆遗传转化）383

11.9　DNA直接导入基因转化384

11.10　种质系统介导基因转化389

第12章　重组体的筛选和鉴定392

12.1　抗药性筛选法392

12.2　显色模型筛选法392

12.3　噬菌斑PCR筛选法395

12.4　DNA限制性酶切图谱法395

12.5　菌落PCR396

12.6　菌落（或噬菌斑）原位杂交法396

12.7　原位PCR397

12.8　Southern杂交399

12.9　Northern杂交401

12.10　Western杂交技术402

12.11 酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay）405

12.12　基因组DNA序列测定技术406

12.13　RAPD技术419

12.14　RFLP技术421

12.15　AFLP技术424

附录428

附录1　常用的测量单位及换算428

1．常用的测量单位428

2．DNA片段的分子质量428

3．DNA物质的量与质量间的换算429

4．核酸摩尔浓度溶液的配制429

附录2　常用的分子质量标准物429

1．DNA分子质量标准（bp）429

2．RNA分子质量标准物430

3．蛋白质分子质量标准430

附录3　凝胶电泳中凝胶浓度的分离范围431

1．琼脂糖凝胶浓度有效分离的线状DNA的大小范围431

2．PAGE凝胶浓度有效分离的蛋白质分子质量范围431

附录4　常用限制酶的主要性质及缓冲液431

1．常用限制酶的主要性质431

2．限制性内切核酸酶作用的3种缓冲液432

附录5　常用抗生素配制及使用浓度432

附录6　主要溶液（母液）及缓冲液配制433

附录7　常用的农杆菌培养基成分（g/L）435

附录8　植物细胞工程常用的培养基配方（mg/L）436

附录9　分子生物学常用缩语442

附录10　热带植物细胞工程常用缩语444

附录11　百年诺贝尔奖（生理学医学）447

附录12　部分重要的生物信息学网络资源452

附录13　热带植物基因工程相关术语解释453