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第一章 绪论1

一、实验须知1

二、实验记录及实验报告的书写2

第二章 生化实验基本技术4

一、生化实验基本操作4

二、生化常用实验样品的制备7

三、离心技术9

四、分光光度法12

五、电泳技术17

六、层析法22

七、生化自动分析技术30

第三章 生物大分子实验技术36

一、蛋白质分析技术36

（一）分光光度技术测定蛋白质含量36

实验一 紫外分光光度法36

实验二 Folin-酚试剂法（Lowry法）38

实验三 双缩脲法40

实验四 考马斯亮蓝法41

实验五 二喹啉甲酸（BCA）法43

实验六 血清总蛋白、清蛋白定量及清／球比值测定（溴甲酚绿法）44

（二）电泳技术鉴定蛋白质45

实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳（CAME）46

实验八 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳48

实验九 细胞蛋白质电泳鉴定50

（三）蛋白质分子量测定52

实验十 SDS-PAGE法测定蛋白质分子量52

实验十一 梯度凝胶电泳法测定蛋白质分子量56

实验十二 凝胶过滤法测定蛋白质分子量58

（四）蛋白质等电点测定60

实验十三 沉淀法测定蛋白质等电点61

实验十四 薄层等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点62

（五）层析技术分离蛋白质或氨基酸64

实验十五 分子筛层析（凝胶过滤法）64

实验十六 CM-52离子交换层析法分离蛇毒蛋白质66

实验十七 DNS-氨基酸聚酰胺薄层层析68

二、酶分析技术70

（一）酶活性测定70

实验十八 碱性磷酸酶（AKP）活力测定71

实验十九 唾液淀粉酶活性测定（碘-淀粉比色法）74

实验二十 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定（连续监测法）75

实验二十一 酶浓度对酶促反应的影响78

（二）酶促反应动力学实验78

实验二十二 碱性磷酸酶Km值的测定79

实验二十三 pH对酶促反应的影响81

实验二十四 温度对酶促反应的影响82

实验二十五 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制83

（三）同工酶测定84

实验二十六 乳酸脱氢酶同工酶的分析（琼脂糖电泳法）85

实验二十八 碱性磷酸酶同工酶的电泳分离及鉴定87

实验二十七 乳酸脱氢酶同工酶分析（醋酸纤维电泳法）87

三、核酸分析技术89

实验二十九 外周血白细胞DNA提取（微量法）89

实验三十 全血DNA的提取与鉴定90

实验三十一 DNA的琼脂糖凝胶电泳91

实验三十二 真核细胞总RNA的制备93

实验三十三 植物组织总RNA的提取（Thomas' RNA extraction）94

实验三十四 质粒DNA的提取与鉴定（碱法快速小量提取）96

一、糖代谢99

实验三十五 总糖测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）99

第四章 物质代谢99

实验三十六 血糖测定（葡萄糖氧化酶法）100

实验三十七 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响102

实验三十八 红细胞中糖的酵解作用103

实验三十九 尿糖的定性检测106

二、脂代谢107

实验四十 血清甘油三酯测定（乙酰丙酮显色法）107

实验四十一 血清甘油三酯测定（酶法，一步终点比色法）109

实验四十二 总胆固醇测定（硫磷铁法）111

实验四十三 血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）112

实验四十四 高密度脂蛋白（HDL）的测定（酶法）114

实验四十五 载脂蛋白apoA1测定（免疫透射比浊法）115

实验四十六 载脂蛋白apoB测定（免疫透射比浊法）117

实验四十七 apoA1与apoB的同时测定（免疫火箭电泳法）118

实验四十八 尿酮体的定性检测120

三、蛋白质代谢121

实验四十九 血清尿素测定（二乙酰一肟法）121

实验五十 血清（或血浆）肌酐测定123

实验五十一 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定125

实验五十二 血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活力测定128

实验五十三 总胆红素及直接胆红素测定130

实验五十四 尿胆（素）原定性检验（改良欧氏法）132

实验五十五 尿胆素定性检验（改良许氏法）133

实验五十六 尿胆红素定性检验133

实验五十七 尿蛋白质定性检测134

四、生物氧化135

实验五十八 乳酸脱氢酶（LDH）及其辅酶的作用135

实验五十九 细胞色素体系的作用及抑制137

实验六十 红细胞ATP含量测定138

实验六十一 维生素B1的测定（荧光法）140

五、维生素及核苷酸代谢140

实验六十二 维生素B1的测定（重氮苯磺酸法）141

实验六十三 维生素C的定量142

实验六十四 红细胞叶酸的测定（改良微生物法）144

实验六十五 血清尿酸的检测（磷钨酸还原法）146

实验六十六 5′-核苷酸酶活力测定148

第五章 遗传信息传递的分析技术152

一、PCR基本原理及其相关技术152

实验六十七 PCR基本原理及实验设计152

实验六十八 逆转录PCR（RT-PCR）155

实验六十九 PCR及其产物限制性片段长度多态性分析157

二、基因克隆及表达分析159

实验七十 PCR产物与pGEM-T重组克隆159

实验七十一 表达载体的构建及转化163

实验七十二 克隆基因的诱导表达及检测167

实验七十三 RNA电泳及Northern Blot169

实验七十四 生物素标记探针的杂交及检测172

实验七十五 蛋白印迹（Western Blot）175

第六章 疾病的分子诊断177

实验七十六 点突变的检测——SSCP-PCR177

实验七十七 p53突变热点的检测178

实验七十八 X-脆性综合征的检测180

实验七十九 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）突变热点的检测182

实验八十 镰型红细胞贫血检测（PCR-RFLP）183

实验八十一 α-地中海贫血点突变的检测185

第七章 综合实验及课题构思187

实验八十二 血清γ-球蛋白的提取及鉴定187

实验八十三 质膜的提取及鉴定189

实验八十四 多肽链N-末端氨基酸分析（DNFB法）193

实验八十五 科研课题构思195

实验八十六 实验设计197

一、生物大分子结构变化与疾病199

实例一 蛋白质结构变化引起疾病199

第八章 有关临床疾病生化机制的探讨及分析199

实例二 核酸结构变化引起疾病200

实例三 酶含量变化与疾病200

实例四 酶结构变化与疾病201

二、代谢异常与疾病202

实例五 糖代谢异常与Ⅰ型肝糖原累积症202

实例六 糖代谢异常与糖尿病合并酮症酸中毒203

实例八 脂代谢异常与动脉粥样硬化204

实例七 脂代谢异常与脂肪肝204

实例九 生物氧化异常与酶缺陷及某些重要化合物的失衡所致的线粒体病205

实例十 生物氧化异常与呼吸链和氧化磷酸化的抑制206

实例十一 氨基酸代谢异常与苯丙酮尿症207

实例十二 氨基酸代谢异常与肝性脑病208

实例十三 核苷酸代谢异常与Lesch-Nyhan综合征209

三、遗传信息表达异常与疾病210

实例十四 DNA修复异常与疾病210

实例十五 RNA转录异常与乳腺癌与基因转录表达异常212

实例十六 蛋白质翻译修饰异常与早发性阿尔茨海默病213

实例十七 基因表达调控异常与疾病215

四、其他生化异常与疾病215

实例十八 血液生化异常与疾病215

实例十九 肝生化异常与疾病216

实例二十 维生素不足与佝偻病217

实例二十一 维生素不足与坏血病218

附录221

附录一 缓冲溶液的配制221

附录二 常用蛋白质分子量及等电点228

附录三 一些常用凝胶技术数据229

附录四 硫酸铵饱和度的常用表232

附录五 常用酸碱指示剂232

附录六 常用原子量表233

附录七 试剂的配制及其分级234

附录八 易变质及需要特殊方法保存的试剂235

附录九 实验误差及数据处理235

附录十 法定计量单位241

附录十一 希腊字母表243

附录十二 常用临床生化检验项目及正常值范围244

主要参考书目245