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第一章 免疫学相关研究1

1.1 免疫系统的基本功能5

1.2 免疫应答的种类特点及其理论7

1.2.1 免疫应答的类型：天然和获得性免疫应答8

1.2.2 免疫应答反应理论8

1.3 免疫模式识别理论9

1.4 可诱导的细胞天然免疫机制11

1.5 对免疫系统的全面认识12

1.5.1 对T细胞抗原受体的基因克隆13

1.5.2 免疫遗传学和MHC限制性的发现13

1.5.3 细胞因子及其受体14

1.5.4 免疫受体信号转导的研究14

1.6 细胞因子的免疫学功能15

1.6.1 调控免疫细胞在中枢免疫器官的发育与分化15

1.6.2 调控免疫细胞在外周免疫器官的发育分化和活化功能16

1.6.3 调控机体的免疫应答16

1.7 中药免疫调节理论与实践应用18

1.8 微RNA对免疫的调控作用21

参考文献23

第二章 细胞凋亡相关研究28

2.1 细胞凋亡的发现与发展28

2.2 细胞凋亡的发生过程与形态学变化30

2.3 细胞凋亡的生物化学变化30

2.4 细胞凋亡的过程及其通路31

2.5 细胞凋亡的caspase效应分子机制33

2.5.1 caspase活化机制33

2.5.2 caspase效应机制34

2.5.3 细胞凋亡的抑制分子36

2.6 细胞凋亡与免疫学关系38

2.7 细胞凋亡与临床医学39

2.8 秀丽新小杆线虫与细胞凋亡研究40

2.9 中药材对细胞凋亡的作用研究42

2.10 微RNA对细胞凋亡的调控作用44

参考文献45

第三章 中药免疫调节与细胞凋亡的关系51

3.1 中药免疫调节与细胞凋亡研究进展51

3.2 中药免疫制剂56

3.2.1 单方制剂56

3.2.2 复方制剂58

3.3 治疗类风湿性关节炎的中药材品种59

3.3.1 树参59

3.3.2 藤石松61

3.3.3 雷公藤62

3.3.4 类风湿性关节炎大鼠模型类型64

3.4 树参和藤石松水提液对RA作用机制的研究65

3.4.1 实验材料65

3.4.2 实验方法66

3.4.3 实验结果69

3.4.4 实验总结与讨论70

3.4.5 研究展望71

参考文献72

第四章 单子叶植物细胞凋亡与过敏性免疫反应77

4.1 引言77

4.2 材料与方法81

4.2.1 材料81

4.2.2 培养基和常用试剂的配制82

4.2.3 秀丽新小杆线虫饲养84

4.2.4 常规分子生物学84

4.2.5 PCR产物回收纯化89

4.2.6 回收产物的TA克隆90

4.2.7 单菌落PCR筛选阳性克隆92

4.2.8 测序93

4.2.9 序列分析93

4.3 结果与分析93

4.3.1 C.elegans的培养93

4.3.2 C.elegans基因组DNA和总RNA的提取纯化94

4.3.3 目的基因ced-3／ced-4的ORF序列扩增结果94

4.3.4 ced-3／ced-4基因的cDNA-3／cDNA-4序列的扩增结果95

4.3.5 PCR产物的TA克隆96

4.3.6 ced-3／ced-4基因的测序与分析97

4.3.7 诱导型植物表达载体的构建99

4.3.8 诱导型表达载体的转化103

4.4 小结112

参考文献114

第五章 双子叶植物细胞凋亡与过敏性免疫反应118

5.1 引言118

5.2 材料与方法121

5.2.1 材料121

5.2.2 农杆菌感受态细胞的制备122

5.2.3 电激法转化农杆菌122

5.2.4 质粒DNA的提取123

5.2.5 农杆菌转化子及载体质粒在农杆菌中的稳定性分析123

5.2.6 拟南芥栽培与农杆菌介导的转化123

5.2.7 外源目的基因的PCR检测128

5.2.8 报告基因GUS的检测分析128

5.2.9 拟南芥根组织表皮细胞凋亡的组织化学鉴定129

5.2.10 病情评价130

5.2.11 统计分析130

5.2.12 植物组织内线虫的染色131

5.3 结果与分析133

5.3.1 转化质粒在农杆菌中的稳定性鉴定133

5.3.2 拟南芥的农杆菌转化和抗性筛选133

5.3.3 目的基因的PCR检测135

5.3.4 T1代转基因苗根系的GUS活性检测评价136

5.3.5 转基因植株的表型检测136

5.3.6 T1代转基因拟南芥基质苗对根结线虫的抗性138

5.4 小结139

参考文献140

第六章 肿瘤细胞凋亡与免疫反应142

6.1 引言142

6.1.1 肿瘤微环境中的免疫细胞142

6.1.2 结直肠癌的现状143

6.1.3 microRNA简介144

6.1.4 microRNA与肿瘤146

6.1.5 藤石松中miRNA的潜在药用价值148

6.2 microRNA的筛选150

6.2.1 实验所使用软件150

6.2.2 实验方法150

6.2.3 实验结果与分析151

6.3 miRNA转染结直肠癌细胞及效率检测152

6.3.1 实验试剂与仪器152

6.3.2 实验方法155

6.3.3 RT-PCR检测细胞转染的有效性164

6.4 结直肠癌细胞增殖检测165

6.4.1 实验试剂与仪器165

6.4.2 实验方法167

6.4.3 实验数据处理方法167

6.4.4 miR-192-5p、miR-30a-5p对结直肠癌细胞增殖的影响168

6.5 结直肠癌细胞凋亡检测169

6.5.1 实验试剂与仪器169

6.5.2 实验方法172

6.5.3 实验数据处理方法174

6.5.4 miR-192-5p、miR-30a-5p对结直肠癌细胞凋亡的影响174

6.6 小结179

参考文献180

附录187

附录A 缩写表187

附录B 中英文缩略表192

附录C 缩略语表194

附录D 秀丽新小杆线虫细胞凋亡基因序列信息195

附录E 实验方法199