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第一章 概述1

第一节 什么是流式细胞术？1

第二节 流式细胞术能做什么？1

第三节 背景与回顾2

第四节 仪器简介4

一、BD公司4

二、Beckman Coulter公司7

三、ABI公司12

四、Union Biometrica公司12

五、Apogee公司14

六、Partec公司15

七、Merck Millipore公司16

第五节 前景与展望19

一、流式细胞术与显微技术结合20

二、流式细胞术与质谱技术结合21

参考文献21

第二章 流式细胞术原理22

第一节 工作原理22

第二节 液流系统23

一、鞘液23

二、喷嘴24

三、流式照射室25

第三节 光学检测系统25

一、激光和荧光25

二、激光照射液流31

三、光学信号33

四、光学元件36

五、光学信号检测系统36

第四节 电子控制系统40

一、光电检测器40

二、通道41

三、阈值42

小结42

参考文献42

第三章 数据储存与分析系统43

第一节 数据储存43

第二节 数据分析43

一、常用术语44

二、流式图谱的表现形式47

三、荧光补偿55

第三节 数据分析实例63

实例一：双参数FSC/SSC分析63

实例二：三参数FSC/SSC/FL1分析63

实例三：四参数FSC/SSC/FL1/FL2简单样本分析64

实例四：四参数FSC/SSC/FL1/FL2复杂样本分析65

小结67

参考文献68

第四章 细胞分选69

第一节 细胞分选的原理69

一、液滴形成69

二、延迟时间70

三、液滴充电与偏转72

四、液滴的收集72

第二节 影响分选的因素73

一、分选速度73

二、分选门的设定75

三、分选模式77

第三节 分选的质量控制与评价78

一、分选的准确性78

二、分选的效率80

三、无菌分选80

四、分选对细胞活性的影响81

第四节 分选前的准备81

一、分选用细胞的制备要求81

二、准备的材料82

三、分选时需要考虑的几个问题83

第五节 细胞分选的应用实例83

实例一：单细胞分选83

实例二：回收极低比例（＜0.01％）的细胞84

实例三：纯化稳定的细胞系85

实例四：淋巴细胞分选87

实例五：组织特异性干细胞分选87

实例六：染料排异性干细胞分选90

实例七：精子分选94

小结96

参考文献97

第五章 细胞表面标志的检测98

第一节 血液细胞的检测98

第二节 细胞表面标志的染色技术100

一、细胞表面分化抗原100

二、直接染色法和间接染色法102

第三节 对照的设置102

一、阴性对照103

二、同型对照105

三、阳性对照106

四、荧光补偿106

第四节 定量测定107

一、外标法108

二、内标法108

三、标准曲线法108

四、分辨率109

第五节 设门的策略111

一、设门111

二、检验门112

三、荧光设门116

四、多色流式分析实例117

小结118

参考文献119

第六章 细胞内成分的检测120

第一节 流式细胞术检测细胞内蛋白的特点120

第二节 细胞内蛋白染色通则122

一、细胞内蛋白染色的步骤122

二、细胞内蛋白染色应遵循的原则123

第三节 磷酸化蛋白的检测123

一、固定和通透细胞124

二、荧光抗体染色125

三、优化染色方法127

四、多种磷酸化蛋白同时检测127

第四节 细胞因子的检测129

一、T淋巴细胞的细胞因子检测129

二、单核细胞的细胞因子检测130

三、细胞内蛋白检测的优缺点131

第五节 微球免疫测定法131

一、CBA方法的原理132

二、CBA方法的流程132

三、CBA方法的检测范围135

四、CBA方法的优缺点136

第六节 磷酸化蛋白与DNA同时检测137

小结137

参考文献138

第七章 细胞核成分的检测139

第一节 常用的DNA染料139

第二节 细胞周期141

一、细胞周期的定量分析方法142

二、粘连细胞的分析144

三、画门方法145

四、BrdU/PI双参数分析细胞周期146

第三节 细胞周期的动态分析147

一、BrdU/PI双参数检测147

二、Hoechst/PI双参数检测148

第四节 DNA总量分析和倍体分析149

一、DNA总量分析149

二、正常生物体的倍体分析150

三、肿瘤细胞的非整倍体分析150

四、植物倍体的分析151

第五节 细胞同步化153

一、自然同步化154

二、人工同步化154

第六节 DNA与RNA同时检测155

一、吖啶橙（AO）同时检测DNA与RNA155

二、Hoechst 33342/Pyronin Y同时检测DNA和RNA156

第七节 DNA与蛋白质同时检测157

一、DNA和总蛋白同时检测157

二、DNA和细胞周期蛋白同时检测157

第八节 染色体分析159

小结160

参考文献161

第八章 细胞增殖与死亡的检测163

第一节 细胞增殖的检测163

第二节 细胞凋亡的检测167

一、散射光的检测167

二、caspases酶检测168

三、线粒体膜电位的检测169

四、质膜的检测172

五、DNA检测173

六、细胞衰老与端粒测定175

第三节 坏死细胞的检测177

一、散射光的检测177

二、膜通透性的检测178

第四节 细胞凋亡、死亡检测中存在的问题178

一、细胞凋亡的频率可能与细胞死亡的发生率无关178

二、以DNA片段来估计细胞凋亡频率的困难179

三、将凋亡小体或核碎片误判为凋亡细胞179

四、细胞凋亡、细胞坏死、细胞凋亡的“坏死阶段”180

五、样品制备过程中凋亡细胞的选择性丢失180

六、吞噬凋亡小体的活细胞伪装成凋亡细胞181

七、商业试剂／试剂盒存在的问题181

八、细胞形态仍然是鉴定凋亡细胞的黄金标准181

小结182

参考文献182

第九章 流式细胞术的应用概述184

第一节 流式细胞术在生物学研究中的应用184

一、在细胞生物学中的应用184

二、在细胞周期研究和DNA倍体分析中的应用185

三、在细胞凋亡分析中的应用185

四、在染色体核型分析中的应用185

五、在分子遗传学中的应用185

六、在免疫学中的应用185

七、在植物学中的应用186

第二节 流式细胞术在医学研究及临床中的应用186

一、在肿瘤学中的应用186

二、在临床细胞免疫学中的应用187

三、在血液病治疗中的应用190

四、在血栓与出血性疾病治疗中的应用191

五、生物学领域的其他应用192

第三节 流式细胞术在农林畜牧养殖业中的应用193

一、在农林业中的应用193

二、在家畜性别控制中的应用193

三、在家畜疾病监控与预防中的应用193

第四节 流式细胞术在微生物学中的应用194

一、在病原微生物研究中的应用194

二、在环境微生物研究中的应用195

第五节 流式细胞术在食品、药品检测方面的应用196

一、在食品检测中的应用196

二、在药品检测中的应用197

第六节 流式细胞术新技术的应用199

一、CBA方法199

二、定量流式细胞术200

小结200

参考文献201

第十章 样本制备和染色方法203

第一节 单细胞悬液的制备203

一、小鼠末梢血的采集和单细胞悬液的制备203

二、小鼠胸腺的分离和单细胞悬液的制备204

三、小鼠骨髓的采集和单细胞悬液的制备204

四、密度梯度离心法制备外周血单个核细胞悬液205

五、小鼠脾脏的分离和单细胞悬液的制备206

六、小鼠成体乳腺单细胞悬液的制备207

七、小鼠胰腺单细胞悬液的制备207

第二节 荧光素标记抗体的制备208

一、FITC/Texas Red标记208

二、生物素标记209

三、Allophycocyanin（APC）或者Phycoerythrin（PE）标记210

第三节 分析和分选用的细胞染色211

一、流式分析用的细胞染色方法211

二、流式分选用的细胞染色方法212

三、SP细胞的染色方法213

四、流式分选用的精子染色方法214

第四节 细胞内分子染色214

一、常用的细胞固定方法215

二、细胞内分子的染色方法215

三、细胞内和细胞外分子同时染色的方法216

第五节 细胞周期染色216

一、固定全细胞的PI染色方法217

二、非固定细胞的无洗染色方法218

三、BrdU染色方法219

四、植物细胞的DNA染色方法220

第六节 细胞同步化实验方法220

一、过剩胸腺嘧啶脱氧核苷法——S期细胞同步化221

二、羟基脲法——S期细胞同步化221

三、秋水仙胺法——M期细胞同步化222

四、血清饥饿法——G0期细胞同步化222

五、G1期和G2期细胞同步化实验方法223

第七节 DNA和RNA同时染色223

一、Hoechst 33342/PY同时检测DNA和RNA223

二、吖啶橙（AO）同时检测DNA和RNA224

第八节 细胞凋亡染色224

一、PI染色法——DNA凋亡峰的检测225

二、Annexin V/PI双染色法226

三、Hoechst 33342/PI双染色法226

四、TUNEL染色法227

小结228

参考文献229

附录230

一、流式细胞术相关网址230

二、流式细胞术相关实验方法网址231

三、荧光素试剂公司231

四、荧光光谱网址232

五、荧光素激发和发射光谱一览表233