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第一部分 组织切片的基本操作1

第一篇 切片制作的基本原理1

第一章 概述1

一、引言1

二、制片方法的种类1

1.非切片法1

2.切片法1

三、制片方法的一般步骤概述1

1.切片法1

2.非切片法2

第二章 杀死、取材和固定3

一、动物杀死的方法3

二、取材和固定3

1.取材和固定的目的3

2.固定的对象4

3.组成固定剂的性质和条件4

4.固定剂的作用5

5.固定剂的媒染效果5

6.固定剂的穿透率5

7.固定中组织的收缩问题5

8.取材和固定应注意事项5

9.常用固定剂的性能及其使用7

10.常用固定剂性质及用法简表15

11.常用固定剂配制表19

第三章 洗涤和脱水19

一、洗涤的目的和洗涤的原则19

二、几种常用固定剂的特殊洗涤法20

三、脱水的目的和方法20

四、脱水剂的类型21

五、常用脱水剂及其使用方法21

第四章 透明23

一、透明的目的23

二、常用透明剂23

第五章 透入与包埋24

一、透入与包埋的目的24

二、透入包埋剂的种类24

1.石蜡24

2.火棉胶25

3.炭蜡26

三、包埋方法的种类26

1.熔化法26

2.挥发法27

3.双重法27

四、透入与包埋的操作27

1.石蜡的透入与包埋法27

2.火棉胶的透入与包埋法28

3.炭蜡的透入与包埋法28

4.双重包埋法28

5.明胶包埋法29

第六章 切片30

一、几种切片法的优缺点30

二、切片机的种类构造31

1.石蜡切片机31

2.火棉胶切片机33

3.冰冻切片机33

三、切片机的保养34

四、切片刀的种类，研磨与保存35

第七章 染色与染料38

一、染色的目的38

二、染色的历史38

三、染料在动物组织学中的应用39

四、染料的一般性质40

1.发色团40

2.助色团43

3.酸性染料和碱性染料46

五、染料的分类48

六、染色的原理50

1.染色的物理作用50

2.染色的化学作用51

3.细胞的染色51

4.萤光染色55

七、染色的方法62

1.整体染色法62

2.组织块染法62

3.蜡带染色法62

4.切片染色法62

5.特殊染色法63

八、媒染剂及促染剂65

九、常用染料的性能及配制68

1.天然染料68

2.煤焦染料72

十、常用染料的主要用途77

十一、各种染色剂用途的归类84

十二、常用染料的溶解度87

第八章 分化与封藏88

一、分化的目的与方法88

二、分化剂的种类89

三、封藏的目的89

四、常用封藏剂90

第二篇 切片的具体制作92

第九章 制片前的准备工作92

一、玻璃器皿的清洗92

二、一般溶液的配制93

三、实验室工作注意事项93

第十章 非切片法的制作94

一、血液涂片的制作94

二、骨磨片的制作法95

三、无丝分裂(膀胱印片)法的制片96

四、肌肉组织浸渍分离制片法96

五、间皮硝酸银染色制片法96

六、鸡胚胎之整体制片法97

第十一章 切片的制作98

一、石蜡切片的制作98

二、冰冻切片的制作106

三、火棉胶切片的制作108

第二部分 细胞、组织的特殊染色法111

第一章 染色体染色法111

一、Ehrlich-Biondi氏染色法示染色体111

二、大染色体之显示112

三、细胞有丝分裂112

第二章 线粒体染色法113

一、Regaud氏染法示线粒体113

二、Regaud氏改良法示线粒体114

三、Cowdry氏法之一示线粒体114

四、Cowdry氏法之二示线粒体114

第三章 高尔基体染色法115

一、Cajal氏硝酸铀法示高尔基体115

二、Da Fano氏改良Cajal氏法示高尔基体116

第四章 糖元染色法116

一、显示糖元的过碘酸Schiff氏反应(P.A.S)116

二、显示糖元的Best s卡红染色法116

三、显示糖元及粘蛋白的银法117

第五章 脂肪染色法117

一、显示中性及酸性脂类的Nile蓝法118

二、Lillie氏油红O染色法示脂肪118

三、脂肪染色法(苏丹Ⅲ法)118

四、脂肪酸119

五、胆固醇119

六、类脂质119

第六章 色素染色法119

一、Dopa氧化酶反应120

二、黑色素染色法(Fortana法)120

三、Dopa黑素反应120

四、证明黑色素的Lillie氏亚铁吸收法121

五、Lillie氏过蚁酸和过醋酸的Schiff氏反应122

六、铁氰化铁还原技术(Lillie氏改良法)123

第七章 含铁血黄素染色法124

一、柏林蓝反应124

二、滕氏蓝反应125

三、用普鲁士蓝证明铁的Bunling氏法125

第八章 胆红素(胆色素)染色法126

一、证明胆色素的Stein氏法126

二、证明胆红素的Hall氏法127

第九章 肾上腺嗜铬细胞染色法127

一、显示肾上腺素红(嗜铬性)的改良Giemsa法128

二、Wiesel氏嗜铬细胞染色法128

三、Ogata-Ogata氏硝酸银嗜铬细胞法129

第十章 垂体细胞染色法129

一、Romeis氏前叶细胞染色法129

二、证明垂体细胞的Slidder氏橘黄G复红亮绿法130

第十一章 嗜银细胞染色法131

一、Masson氏银浸法示肠嗜银细胞131

二、龙桂开嗜银细胞银浸法示肠嗜银细胞132

三、Fortana-Masson嗜银颗粒染色132

四、显示嗜银细胞颗粒的重氮法133

第十二章 肥大细胞染色法133

一、鲍鉴清天真-伊红-美蓝染色法133

二、证明肥大细胞颗粒的Maximov氏酒精硫堇法134

三、证明肥大细胞的甲苯胺蓝染色法134

第十三章 包涵体染色法134

一、证明包涵体的Mann氏甲基蓝-伊红法135

二、昆虫体内包涵体染色法135

第十四章 细菌染色法137

一、Gram-Weigert细菌染色137

二、Ziehl-Neelsen氏抗酸染色137

三、Wade-Fite氏抗酸新染法138

四、证明结核杆菌的石炭酸-复红-金胺苯酚法138

第十五章 真菌染色法139

一、证明真菌的Grocott氏乌洛托品银法139

二、证明真菌的Gridley氏法141

第十六章 螺旋体染色法142

一、证明螺旋体的Camp bell和Rosahn法142

二、Levaditi氏法示梅毒螺旋体143

第十七章 淀粉样变性染色法143

一、证明类淀粉物的Puchtler、Sweat和Levine氏刚果红法143

二、证明类淀粉物的结晶紫法144

三、证明类淀粉物Lieb氏结晶紫法145

第十八章 胶元纤维染色法146

一、Heidenhain氏Azan染色法146

二、Masson氏法147

三、Mallory氏磷钼酸-苏木素染色法147

四、Van-Gieson氏法148

五、Lillie氏猩红-苦味酸-苯胺蓝法148

第十九章 弹性纤维染色法149

一、Verhoeff氏弹性纤维染色法149

二、Orcein氏弹性纤维染色法149

第二十章 网状纤维染色法150

一、Gordon及Sweet氏原法150

二、Del Rio-Hortega氏法151

三、Foot氏法151

四、Wilder氏法152

第二十一章 骨组织的染色法153

一、钙质染色法--Kossa氏法153

二、Schmorl氏硫堇--苦味酸法154

三、Lillie氏硝酸银沉淀法154

四、Romeis氏美蓝染色法155

第二十二章 肌组织的染色法155

一、Sch？ffler氏肌原纤维、网状纤维及胶元纤维同时显出法155

二、Retterer氏法显示横纹肌156

三、显示心肌梗死的酸性复红染色法156

第二十三章 消化系统的染色法157

一、Alcian蓝-PAS染色法--示粘液染色157

二、P.Mayer氏粘液卡红染色法158

三、K.S.Ludwig氏胃腺细胞鉴别染色法158

四、Kopsch氏改良Golgi氏法示胆毛细管159

五、张保真铁苏木素染色法示胆毛细管159

六、胰腺Gomori氏铬铝苏木素法159

七、去氧核糖核酸、多糖类、蛋白质的三色染色法161

第二十四章 神经系统162

一、尼氏小体染色--Pischinger氏缓冲美蓝法162

二、染肉眼可见的脑切片的一种方法162

三、Golgi氏速法示神经细胞及突起163

四、Cox氏法示神经细胞及突起164

五、R.Spoerri氏法示神经细胞体及突起164

六、V.Apathy氏氯化金法示神经原纤维164

七、Cajal氏冰冻切片浸渍法示神经原纤维165

八、Weigert-Pal氏法示髓鞘165

九、证明髓鞘内脂肪变性的Marchi氏法166

十、证明髓磷质的Page氏法166

十一、证明神经胶质纤维的Holzer氏法167

十二、证明神经胶质纤维和细胞的Mallory氏苯胺蓝橘黄G法168

十三、Cajal氏金升汞法示神经胶质(星形细胞)168

十四、Hortega氏少突胶质细胞碳酸银法169

十五、Hortega氏小胶质细胞碳酸银法170

第三部分 组织化学染色法171

第一章 常用组织化学固定剂及试剂171

一、固定剂171

二、常用酸溶液简便配制法174

三、常用碱溶液简便配制法175

四、常用盐溶液简便配制法176

五、缓冲液176

第二章 蛋白质的组织化学法179

一、显示蛋白质的汞-溴酚蓝(HgBpB)法179

二、显示蛋白质结合性--NH2基法180

1.茚三酮-Schiff法180

2.羟基萘甲醛法180

3.氯胺-T法181

4.乙酰苯反应182

三、显示含色氨酸、组氨酸和酪氨酯的蛋白质偶联四唑反应183

四、显示含酪氨酸、SH及NH2基蛋白质的二硝基氟苯(DNFB)法184

五、显示碱性蛋白质法186

1.酸性搔洛铬花青法186

2.显示核中碱性蛋白质的萘酚-黄S法186

3.显示核中碱性蛋白质的碱性坚牢绿法187

六、显示硫氢基及二硫键的方法188

1.显新偶联四唑反应188

2.显示SH基和SS基的DDD反应189

3.显示SH基和SS基铁氰化铁法191

4.硝蓝四唑法192

5.显示SH基的萘基马来酰亚胺(HNI)反应193

6.显示SH基的汞橙(RSR)法194

七、显示SS基法196

1.疏基醋酸-铁氰化铁法196

2.显示SS基的过甲酸-Schiff法(PFAS)196

3.过甲酸-Alcian蓝法197

八、显示酪氨酸法198

1.Morel-Sisley重氮化法198

2.Millon反应198

九、显示色氨酸法200

1.萘基乙二胺反应(NED)法200

2.二甲氨基苯甲醛DMAB-亚硝酸盐法201

3.吲哚类的蔷薇吲哚(Rosindoee)反应201

4.显示吲哚类的后偶联苄叉反应202

5.显示吲哚类的咕吨氢醇反应203

6.胃蛋白酶提取法204

十、显示精氨酸法205

1.坂口Sakaguchi氏反应Ⅰ法205

2.坂口8-羟喹啉反应Ⅱ法205

3.显示含精氨酸及赖氨酸蛋白质的胰蛋白酶提取法206

十一、显示弹性蛋白法207

1.醛品红染色法207

2.Moore法207

3.显示弹力组织的甲苯二酚-新品红法208

4.显示弹力组织的万-魏氏染色法209

十二、显示神经分泌物法209

1.醛品红染色法209

2.Bargmann氏铬苏木素法211

十三、显示垂体细胞的类粘蛋白颗粒211

1.Wilson-Ezrin法211

2.Halmi法212

3.PFAAB.PAS橙G法212

第三章 核酸的组织化学法213

一、显示DNA法213

1.Feulgen染色法213

2.Feulgen-萘甲酸酰肼反应215

二、显示DNA及RNA的甲基绿-焦宁法217

三、显示核酸的酶提取法220

1.显示RNA的核糖核酸酶提取法220

2.显示DNA的脱氧核糖核酸酶的提取法221

四、显示核酸的萤光酮的改良Turchini法222

五、显示核酸的吖啶橙萤光染色法223

六、显示核酸的棓花青法223

1.Einarson的棓花青-铬明矾法223

2.改良棓花青法225

第四章 碳水化合物的组织化学法225

一、显示多糖、粘多糖及粘蛋白等的Schiff反应225

1.McManus法227

2.血细胞内糖元定位法228

3.血细胞内糖元定位简法229

4.培养细胞内糖元定位229

5.Hotchkiss氏法229

6.Shimizu和Kumanoto四醋酸铅-Schiff法230

7.Lhotka氏铋酸钠-Schiff法231

二、显示糖元及粘蛋白的银染法231

三、显示抗坏血酸银法232

1.酸性硝酸银法233

2.Bacchus法233

3.Jensen及Karaljian法234

4.Bourne,Barnett及Bourne法234

四、显示酸性粘多糖法234

1.选择性萤光染色法234

2.显示酸性粘多糖的渗析铁法235

3.显示酸性粘多糖类的渗析铁与PAS染色结合法235

五、显示透明质酸类物质的透明质酸酶提取法236

六、显示结缔组织基质粘多糖的Evan氏蓝法237

七、显示乙酰化多糖类的高铁氧肟酸法237

八、显示葡萄糖的Okamoto法238

九、显示戊糖的改良Roe-Rice法239

第五章 类脂及其衍生物的组织化学法239

一、显示类脂的方法240

1.显示神经组织中的酸性多糖类和中性脂肪的改良Hale氏法240

2.显示中性脂肪及酸性类脂的Cain氏Nile蓝法240

3.显示类脂的丙二醇苏丹法241

4.显示类脂的磷化氢3R续发性萤光法241

5.显示类脂的控制铬化作用法242

6.显示酸性脂类的Feyrter氏“封片染色”法242

二、显示隐脂类的苏丹黑B法243

1.Ackerman血涂片法243

2.Berenbaum法243

三、显示糖脂的方法244

1.Diezel改良的Molisch反应法244

2.Diezel改良的Br?ckner反应法244

四、显示磷脂类的方法244

1.酞花青铜法244

2.酸性氧化苏木素法245

3.Nile蓝法248

4.显示磷酯、脑苷脂的Okamoto氏汞-二苯卡巴腙法248

五、显示变性髓磷脂的Marchi法249

1.Swank及Davenport法250

2.Wolman法250

六、显示脂肪酸的方法252

1.Fischler铜法252

2.Okamoto等氏改良Fischler法252

七、显示含不饱和键脂类的方法253

1.过甲酸-Schiff氏法253

2.显示不饱和脂类的紫外线Schiff法254

八、显示固醇类的方法254

1.改良的Schultz法254

2.显示胆碱脂类的磷钼酸法255

3.显示胆固醇的三氯化铋法255

4.显示胆固醇及其酯的鉴别法256

5.显示胆固醇及胆固醇脂的Okamoto法256

6.显示类固醇的Schultz变法256

第六章 醛基反应257

一、显示缩醛磷脂的浆醛反应257

1.Cain 1949法257

2.Hayes 1949法258

二、显示醛基的方法258

1.苯肼-甲？反应258

2.萘甲酸酰肼反应259

3.Gomori氏氨银反应260

三、显示类皮质激素的a-乙酮醇基法261

第七章 显示酶的组织化学方法261

一、显示碱性磷酸酶的钙-钴法261

1.Gomori原法261

2.Danielli改良法263

3.Fredriesson 1956改良法264

4.Butchnet及Chuyen法265

5.显示血涂片中碱性磷酸酶的钙-钴法265

二、显示碱性磷酸酶的偶氮偶联染料法266

1.Pearse 1960法266

2.显示血细胞的碱性磷酸酶的偶氮偶联法267

3.Kaplaw、Monio及Hayhoe偶氮偶联法268

4.显示碱性磷酸酶的萘酯AS-磷酸酯偶氮染料法268

三、显示5-核苷酸酶法270

1.Wachstein及Meisel铅法270

2.Pearse及Rise钙法270

四、显示缩醛酶的钙-钴法271

五、显示ATP酶的方法272

1.Wachstein及Meisel铅法272

2.Padykula及Herman钙法272

3.Maengwyn,Davies钙法273

4.Hiles改良Herman法274

六、显示硫胺素焦磷酸酶的方法274

七、显示无机焦磷酸酶的方法275

八、显示无机多偏磷酸酶的方法275

九、显示葡萄糖-6-磷酸酶法276

1.Chiquoine276

2.Wachstein及Meisel277

十、显示酸性磷酸酶的铅法277

1.Gomori 1950277

2.MeDendel改良法278

3.Rozenszajn氏改良法279

4.Ruyter石蜡切片法1964280

5.Takeuchi及Tanoue法280

十一、显示酸性磷酸酶的偶氮偶联法281

1.Pearse 1960法281

2.显示酸性磷酸酶的萘酚AS-BI磷酸酯法281

3.显示酸性磷酸酶的后偶联法282

十二、显示磷酸酰胺酶法283

1.Gomori铅法283

2.Meyer与Weinmann改良铅法283

3.Burstone的偶联偶氮染料法284

十三、显示酯酶的方法284

1.Gomori醋酸a-萘酯法284

2.Gomori的萘酚AS醋酸酯法285

3.Burstone的萘酚AS-LC醋酸酯法286

4.Holt及Withers的吲哚酚醋酸酯法287

5.Gomori的Tween法288

6.显示脂肪酶--酯酶的改良Tween法289

十四、显示胆碱酯酶的方法289

1.Gomori十四酰胆碱法289

2.Gomori的乙酰硫胆碱法290

3.Karnovsky改良法291

4.显示胆碱酯酶的乙酰--及丁酰硫胆碱法292

5.改良的Koelle硫胆碱及抑制剂法294

6.硫赶醋酸法296

十五、显示β-葡萄糖醛酸苷酶的方法296

1.Fishman及Baker的正铁羟基喹啉法296

2.Burton及Pearse的8-羟基喹啉偶联偶氮法297

3.Seligman、Tson、Rutenburg及Cohen的后偶联法298

十六、显示β-半乳糖苷酶的后偶联法(Rutenberg等1958b)298

十七、显示α-葡萄糖苷酶的后偶联法299

十八、显示N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶的方法300

十九、显示葡聚糖磷酸化酶及转糖基酶的方法300

二十、显示细胞色素氧化酶的方法301

1.Moog的G-Nadi反应301

2.Naehlas等的ADN法302

3.Burstone的N-苯基-对-苯二胺法303

二十一、显示过氧化物酶法304

1.De Robertis及Grasso的联苯胺反应法304

2.Van Duijn 1955法305

3.血涂片法305

4.Ritter及Oleson的稳定性嗜苏丹细胞的a-萘酚反应306

5.无色专利蓝法307

二十二、显示过氧化氢酶的乙基过氧化氢化法307

二十三、显示“氢过氧化物酶”的乙基过氧化氢法308

二十四、显示Dopa-氧化酶(酪氨酸酶)法309

二十五、显示单胺氧化酶法310

1.萘酰肼法310

2.四唑盐法311

二十六、显示琥珀酸脱氢酶(SDH)的四唑盐法312

1.Nachlas法312

2.Gobel s氏改良Rutenberg Waoman Seligman的方法314

3.Peason氏法315

4.培养细胞Nitro-BT法316

5.MTT法317

二十七、显示DPN及TPN黄素蛋白酶的方法317

1.MTT法317

2.显示DPN-黄素蛋白酶的Nitro-BT法318

3.显示TPN-黄蛋白酶的Nitro-BT法319

二十八、显示要求DPN及TPN的脱氢酶的四唑盐法319

二十九、显示亮氨酸氨基酞酶的方法321

三十、显示组织蛋白酶C的吲羟醋酸酯法322

三十一、显示芳基硫酸酯酶的后偶联法323

三十二、显示碳酸酐酶的方法323

第八章 其他组织化学法324

一、显示肠嗜银细胞颗粒法324

1.重氮法324

2.Gibb氏法325

二、显示脂褐质的方法326

1.Schmorl法326

2.铬明矾苏木素法326

3.显示抗酸性脂褐质的Ziehl-Neelsen长法326

三、鉴别脂褐质和黑色素的Nile蓝法327

1.Hueck法327

2.Lillie327

四、显示脂肪过氧化物的方法328

1.Glavind等法328

2.二氨基芴法328

〔附〕放射自显影术329