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第一章 核酸的分离纯化1

第一节 从哺乳动物组织中制备基因组DNA2

实验一 从哺乳动物组织中制备基因组DNA2

Ⅰ常规制备组织或培养细胞基因组DNA2

Ⅱ快速制备组织或培养细胞基因组DNA4

Ⅲ从血白细胞中制备基因组DNA5

第二节 核酸的定量和质量检测及贮存6

实验二 核酸的定量和质量检测及贮存6

Ⅰ异硫氰酸胍／氯化铯超离心法制备总RNA7

第三节 从哺乳动物组织中制备总RNA7

实验三 从哺乳动物组织中制备总RNA7

Ⅱ酸性异硫氰酸胍／酚／氯仿抽提分离总RNA9

第四节 琼脂糖凝胶电泳12

实验四 琼脂糖凝胶电泳15

Ⅰ常规琼脂糖凝胶电泳15

Ⅱ碱性琼脂糖凝胶电泳16

Ⅰ酚的重蒸馏17

实验五 酚／氯仿抽提液的制备17

第五节 酚／氯仿抽提液的制备17

ⅡSS－酚（saltsaturatedphenol）的制备18

第二章 分子杂交20

第一节 核酸分子探针的标记概述20

第二节 Southern印迹杂交26

实验一 Southern印迹杂交26

Ⅰ虹吸印迹法27

Ⅲ真空转移法29

Ⅱ电转法29

第三节 Northern印迹杂交30

实验二 Northern印迹杂交30

Ⅰ聚乙二醛和二甲基亚砜变性电泳31

Ⅱ甲醛变性胶电泳法32

Ⅲ甲基氢氧化汞电泳33

第四节 斑点及狭缝印迹杂交34

实验三 斑点及狭缝印迹杂交34

Ⅰ标准方法35

Ⅲ完整细胞斑点吸印法36

Ⅱ胞质RNA的快速提取及点样法36

第五节 核酸原位杂交37

实验四 核酸原位杂交37

Ⅰ组织细胞内mRNA的原位杂交38

Ⅱ与间期细胞内染色质DNA的原位杂交40

Ⅲ非放射性核素标记在核酸原位杂交中的应用40

第六节 Western印迹42

实验五 Western印迹42

第三章 分子克隆45

第一节 质粒DNA的小量提取45

实验一 质粒DNA的小量提取45

第二节 DNA的限制性核酸内切酶消化48

实验二 DNA的限制性核酸内切酶消化48

第三节 目的DNA片段的回收52

实验三 目的DNA片段的回收52

Ⅰ低熔点琼脂糖凝胶电泳回收DNA片段53

Ⅱ透析袋电泳洗脱法回收目的DNA片段54

实验四 载体质粒DNA与目的DNA片段的连接56

第四节 载体质粒DNA与目的DNA片段的连接56

第五节 重组质粒DNA转化细菌58

实验五 重组质粒DNA转化细菌58

第六节 重组克隆筛选和鉴定61

实验六 重组克隆筛选和鉴定61

Ⅰ平板筛选64

Ⅱ酶切分析及凝胶电泳检测鉴定65

第七节 削减杂交克隆66

实验七 削减杂交克隆66

Ⅳ序列测定66

Ⅴ免疫分析66

ⅢPCR检测66

第四章 DNA序列的测定70

第一节 DNA序列测定方法的概述70

第二节 制备序列测定的DNA模板74

实验一 制备序列测定的DNA模板74

Ⅰ从M13噬菌体中制备单链模板75

Ⅱ从重组质粒中制备双链DNA模板77

实验二 双脱氧法测定DNA序列78

第三节 测定DNA序列78

第四节 变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳83

实验三 重组质粒序列测定反应产物的电泳83

第五章 聚合酶链反应86

第一节 基本PCR技术86

第二节 PCR引物设计92

第三节 RT-PCR技术93

实验一 RT-PCR93

实验二 反向PCR95

第四节 反向PCR95

第五节 差异显示PCR99

实验三 差异显示PCR99

第六章 cDNA文库的构建105

第七章 蛋白质表达111

第一节 外源性基因在大肠杆菌中的诱导表达111

实验一 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建111

实验二 诱导靶蛋白表达的优化113

第二节 外源性基因在真核细胞中的表达114

实验三 大量表达靶蛋白114

实验四 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建115

实验五 转染116

Ⅰ电穿孔法116

Ⅱ磷酸钙共沉淀法117

ⅢDEAE－葡聚糖转染技术118

Ⅳ脂质体法118

实验六 转染克隆的筛选和分离121

实验七 在稳定转染的细胞中检测目的基因的表达123

第三节 在稳定转染的细胞中检测目的基因的表达123

第八章 反转录病毒载体介导的基因转移127

实验一 复制缺陷性重组反转录病毒的构建128

实验二 磷酸钙介导的重组反转录病毒载体转染131

实验三 获取和滴定病毒132

第九章 蛋白质的分离纯化和分析133

第一节 比色法测定蛋白质含量133

实验一 Folin－酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质浓度134

实验二 改良Lowry法测定蛋白质浓度136

实验三 考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质浓度139

实验四 紫外吸收法测定蛋白质含量141

第二节 蛋白质的单向聚丙烯酰胺凝胶电泳143

实验五 盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质145

实验六 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质分子量149

实验七 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定蛋白质分子量154

第三节 蛋白质的双向凝胶电泳157

实验八 IEF/SDS-PAGE双向电泳分离血清蛋白质158

实验九 AGE/PG-PAGE双向电泳分离鉴定前β－高密度脂蛋白163

第四节 蛋白质的凝胶过滤层析166

实验十 葡聚糖凝胶层析法测定蛋白质分子量168

第五节 蛋白质的离子交换层析173

实验十 一离子交换层析法纯化细胞色素c175

第六节 蛋白质的亲和层析178

实验十 二亲和层析法纯化猪胰蛋白酶180

实验十 三亲和层析法纯化尿激酶184

第七节 高效液相层析分离纯化蛋白质187

第八节 质谱法分析蛋白质、多肽195

第一节 血清IgG的纯化及鉴定202

实验一 血清IgG的纯化及鉴定202

第十章 免疫生物化学202

第二节 免疫电泳技术205

实验二 单向定量电泳（火箭免疫电泳）206

实验三 单向免疫扩散测定人血清载脂蛋白B100208

实验四 酶联免疫分析技术209

实验五 双抗体夹心法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）210

第十一章 生物芯片技术212

第一节 概述212

第三节 生物芯片技术的应用221

第二节 生物芯片的操作基因芯片蛋白芯片芯片实验室221

第十二章 生物信息学229

第一节 生物信息数据库和查询229

第二节 局部序列相似性对比231

实验一 局部序列相似性对比231

第三节 蛋白质的结构与功能预测240

实验二 蛋白质的结构与功能预测240

第四节 基因芯片表达数据的聚类分析246

实验三 基因芯片表达数据的聚类分析246

附录1 常用的标准蛋白质marker及其分子量参考值256