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第一篇 基本实验1

第一章 医学细胞生物学基本实验1

第一节 细胞的显微结构1

实验一 细胞的一般形态结构观察1

实验二 细胞的显微测量技术5

第二节 细胞生理活动6

实验三 胞质环流6

实验四 细胞吞噬7

实验五 细胞活性鉴定8

实验六 细胞融合9

第三节 细胞化学成分的显示11

实验七 普通细胞化学12

实验八 核酸细胞化学16

实验九 酶细胞化学19

实验十 荧光细胞化学与免疫荧光细胞化学22

第四节 细胞增殖27

实验十一 无丝分裂28

实验十二 有丝分裂29

实验十三 减数分裂32

实验十四 X染色质标本制备与观察35

实验十五 早熟染色体凝集（PCC）的诱导和观察36

第五节 细胞培养39

实验十六 原代细胞培养39

实验十七 细胞传代培养42

实验十八 体外培养细胞的观察方法45

第二章 医学生物化学基本实验50

第一节 蛋白定量分析实验50

实验一 双缩脲法测定蛋白质含量50

实验二 Folin-酚法测定蛋白质含量51

实验三 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量52

实验四 紫外分光光度法测定蛋白质含量53

第二节 层析分离纯化实验54

实验五 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定55

实验六 葡聚糖凝胶分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶混合液57

实验七 离子交换层析分离混合氨基酸58

第三节 电泳分析实验59

实验八 血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳59

实验九 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳61

实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LDH同工酶63

实验十一 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量65

实验十二 等电聚焦法测定蛋白质等电点67

第四节 酶学实验69

实验十三 pH对酶促反应速度的影响69

实验十四 温度对酶促反应速度的影响72

实验十五 底物浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶米氏常数的测定72

实验十六 抑制剂对酶促反应速度的影响74

实验十七 酶的提取及比活性测定76

第五节 物质代谢实验80

实验十八 胰岛素对血糖含量的影响81

实验十九 邻甲苯胺法测血糖含量81

实验二十 糖酵解中间产物的鉴定82

实验二十一 血清中谷丙转氨酶活性的测定84

实验二十二 血清脂类含量分析86

第三章 医学分子生物学基本实验88

第一节 分子克隆实验88

实验一 质粒DNA的提取与纯化88

实验二 质粒DNA浓度和纯度的测定90

实验三 DNA琼脂糖凝胶电泳92

实验四 DNA的限制性酶切反应93

实验五 目的DNA和载体DNA酶切片段的回收94

实验六 目的基因与载体的体外连接95

实验七 大肠埃希菌感受态细胞的制备96

实验八 重组子的转化及阳性克隆的初步筛选97

实验九 阳性重组子的鉴定98

第二节 外源基因在原核细胞中的表达99

实验十 外源基因在大肠埃希菌的诱导表达和提取99

实验十一 亲和层析法纯化重组蛋白100

第三节 PCR技术102

实验十二 PCR扩增目的基因102

实验十三 总RNA提取及RT-PCR扩增目的基因103

实验十四 实时定量PCR分析真核基因的表达107

第四节 蛋白质的表达分析108

实验十五 蛋白质印迹实验108

实验十六 免疫细胞化学检测细胞内蛋白表达110

实验十七 外源基因在真核细胞中的表达112

第四章 医学遗传学基本实验115

第一节 细胞遗传学实验115

实验一 人类外周血淋巴细胞培养115

实验二 人类外周血淋巴细胞染色体的制备116

实验三 人类染色体G显带118

实验四 人类G显带染色体核型分析119

实验五 姐妹染色单体交换（SCE）标本的制备与观察121

第二节 分子遗传学实验123

实验六 短串联重复序列（STR）的多态性分析123

实验七 限制性片段长度多态分析127

实验八 单链构象多态性的检测129

第三节 人类遗传性状分析133

实验九 遗传性状基因型与表型分析133

实验十 遗传病的家系分析和再发风险估计135

第二篇 综合实验137

第一章 细胞增殖活力分析137

第一节 细胞增殖的定量分析137

实验一 细胞琥珀酸脱氢酶活性检测（MTT法）137

实验二 细胞周期的检测138

第二节 细胞内ATP含量测定139

实验三 人淋巴细胞ATP活力检测139

第三节 细胞增殖的染色分析140

实验四 BrdU染色法检测细胞增殖140

实验五 Ki-67免疫染色法检测细胞增殖141

第二章 细胞凋亡的诱导与检测143

第一节 细胞凋亡的诱导与形态结构观察143

实验一 培养细胞的凋亡诱导144

实验二 台盼蓝染色检测凋亡细胞145

实验三 苏木精-伊红染色检测凋亡细胞145

实验四 Giemsa染色检测凋亡细胞146

实验五 吖啶橙荧光染色检测凋亡细胞147

实验六 Ho.33342与PI荧光双染检测凋亡细胞148

第二节 凋亡细胞的超微结构观察149

实验七 透射电镜观察凋亡细胞149

实验八 扫描电镜观察凋亡细胞150

第三节 凋亡细胞的定量分析151

实验九 流式细胞术检测凋亡细胞151

第四节 细胞凋亡的分子生物学特征153

实验十 凋亡细胞DNA ladder检测153

实验十一 Caspase 3酶活性测定154

实验十二 凋亡相关蛋白表达水平检测155

实验十三 凋亡相关基因转录水平的表达检测156

第三章 细胞的自噬与分析159

第一节 细胞自噬的形态学分析159

实验一 透射电镜观察自噬体的形成160

实验二 GFP-LC3自噬斑点的荧光显微镜检测161

第二节 自噬标志蛋白的表达分析162

实验三 蛋白质印迹法检测自噬标志蛋白的变化162

第四章 真核生物基因表达调控分析164

实验一 甲基化特异性PCR检测基因启动子甲基化164

实验二 荧光素酶报告基因瞬时转染分析启动子活性167

第五章 四氯化碳致培养肝细胞损伤的分析172

第一节 培养肝细胞损伤模型的诱导与形态学分析172

实验一 肝细胞损伤的诱导及常规形态检查172

实验二 损伤细胞的脂肪变性检测173

第二节 肝细胞损伤的定量分析174

实验三 CCK法检测细胞存活率174

第三节 肝损伤细胞相关酶活性的分析175

实验四 肝损伤细胞乳酸脱氢酶活性检测175

实验五 肝损伤细胞谷丙转氨酶活性检测176

第四节 肝损伤细胞相关基因的表达分析177

实验六 肝细胞中PPAR-γ1表达水平的检测177

第六章 人遗传性状基因的分子诊断与应用179

实验一 Duchenne型肌营养不良的基因诊断179

实验二 多重RT-PCR检测染色体易位180

实验三 利用短串联重复序列进行亲权鉴定183

第三篇 创新实验184

实验一 糖尿病的生化及遗传检测分析实验184

实验二 唐氏综合征的产前诊断方法184

实验三 家族性高胆固醇血症的诊断方法185

实验四 血友病的诊断186

实验五 重组人促红细胞生成素在细胞中的表达、分离和纯化187

实验六 p53基因与肿瘤相关性实验设计187

实验七 小鼠组织细胞形态及功能分析188

实验八 小鼠组织特种细胞的形态及特征性成分的鉴定189

附录190

附录一 实验室规则190

附录二 实验室安全及防护191

附录三 实验室常用玻璃仪器的洗涤与清洁192

附录四 生物绘图的要求与方法195

附录五 生物学实验设计报告196

附录六 常用实验技术原理197