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第一章 绪论1

第一节 分子生物学检验技术的理论基础1

一、病原生物基因与人类感染性疾病2

二、基因变异与单基因病2

三、基因变异与多基因病2

四、线粒体基因变异与线粒体遗传病2

五、肿瘤相关基因与恶性肿瘤3

第二节 分子生物学检验技术的分析对象3

一、病原生物基因3

二、基因变异4

三、基因多态性4

第三节 分子生物学检验技术的应用前景5

第二章 基因组与基因组学6

第一节 原核生物基因组7

一、原核生物基因组特征7

二、质粒9

三、转座因子12

第二节 病毒基因组13

一、病毒基因组特征13

二、DNA病毒15

三、RNA病毒20

第三节 真核生物基因组23

一、细胞核基因组特征23

二、细胞质基因组特征30

三、基因组结构与疾病30

第四节 人类基因组与人类基因组计划34

一、人类基因组34

二、人类基因组计划35

三、功能基因组计划37

第三章 蛋白质组与蛋白质组学41

第一节 蛋白质组及其质点的分离与分析42

一、分离纯化42

二、分析鉴定48

第二节 蛋白质相互作用研究52

一、蛋白质-蛋白质53

二、蛋白质-核酸55

第三节 蛋白质数据库及其应用57

一、蛋白质数据库57

二、蛋白质数据库应用58

第四章 肿瘤相关基因61

第一节 癌基因61

一、病毒癌基因62

二、细胞癌基因63

三、原癌基因激活机制66

第二节 抑癌基因68

一、抑癌基因与肿瘤69

二、抑癌基因失活机制69

第三节 肿瘤转移相关基因71

一、肿瘤转移基因71

二、肿瘤转移抑制基因72

第四节 肿瘤发生73

第五节 肿瘤相关基因的检测和评价74

一、检测策略与主要检测技术74

二、原癌基因与抑癌基因的检测74

第五章 核酸的分离与纯化77

第一节 核酸分离与纯化的设计原则77

一、材料与方法的选择78

二、技术路线设计78

三、鉴定与保存79

第二节 基因组DNA的分离与纯化81

一、分离与纯化方法82

二、DNA片段回收84

三、方法学评价与质量保证86

第三节 质粒DNA的提取与纯化87

一、质粒的结构与理化性质87

二、提取与纯化方法88

三、质粒DNA的回收90

四、方法学评价与质量保证90

第四节 RNA的分离与纯化91

一、RNA的制备条件与环境91

二、总RNA的分离与纯化91

三、mRNA的分离与纯化93

第六章 DNA重组技术96

第一节 常用工具酶97

一、限制性内切酶97

二、DNA连接酶98

三、分子克隆中常用的其他酶99

第二节 常用载体99

一、质粒载体100

二、噬菌体载体102

三、穿梭载体104

四、人工染色体106

第三节 DNA重组与鉴定106

一、DNA重组107

二、重组子筛选与鉴定111

三、DNA序列测定114

第七章 克隆基因表达及基因干扰118

第一节 外源基因表达118

一、原核生物表达体系119

二、真核生物表达体系122

第二节 表达产物分离、纯化与鉴定126

一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化126

二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化127

三、CHO细胞重组表达蛋白的分离与纯化127

四、表达产物的鉴定128

第三节 基因表达干扰技术129

一、反义核酸技术129

二、核酶与脱氧核酶131

三、小干扰RNA137

四、微RNA142

第八章 核酸分子杂交技术146

第一节 基本原理与分类147

一、基本原理147

二、分类147

第二节 探针设计与标记151

一、探针种类选择151

二、探针长度153

三、探针标记153

第三节 分子杂交157

一、核酸分子与固相介质的结合157

二、杂交160

三、信号检测161

第四节 核酸分子杂交技术应用164

一、Southern印迹杂交164

二、Northern印迹杂交165

三、原位杂交165

四、液相杂交167

第九章 聚合酶链反应及相关技术169

第一节 聚合酶链反应169

一、PCR原理和反应过程169

二、PCR反应体系和反应条件170

三、PCR技术质量控制173

第二节 以PCR为基础的相关技术174

一、反转录PCR174

二、巢式PCR175

三、定量PCR175

四、多重PCR179

五、PCR诱导定点突变180

六、原位PCR181

七、差异显示PCR182

八、其他扩增技术183

第三节 PCR产物检测185

一、PCR-RFLP185

二、等位基因特异性寡核苷酸185

三、单链构象多态性186

四、变性梯度凝胶电泳186

五、融点曲线分析187

六、PCR产物序列分析187

第十章 生物芯片技术189

第一节 DNA芯片190

一、芯片制备191

二、样品制备193

三、杂交与结果分析194

四、基因芯片技术在医学中的应用194

第二节 蛋白质芯片196

一、芯片制备197

二、样品制备197

三、杂交与结果分析197

四、蛋白质芯片技术在医学中的应用198

五、存在的问题198

第十一章 分子生物学检验技术的临床应用200

第一节 样本来源201

一、病原生物基因组样本201

二、人类基因组样本201

第二节 在病原生物基因组相关疾病研究和诊断中的应用202

一、感染性疾病诊断和治疗监测202

二、耐药监测与分子流行病学调查211

三、医院获得性感染监测与控制211

第三节 在人类基因组相关疾病研究和诊断中的应用212

一、在单基因病中的应用212

二、在多基因病中的应用219

三、在线粒体遗传病中的应用222

四、在白血病中的应用224

第四节 在移植配型和个体识别中的应用225

一、在移植配型中的应用225

二、在个体识别中的应用226

参考文献229

中英文索引231