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绪论1

第一部分 文献研究7

第一章 脂肪细胞分化概论7

一、脂肪细胞分化的干细胞学说7

二、脂肪细胞分化过程及表型特征7

三、脂肪细胞分化各阶段的标志分子8

（一）脂肪细胞分化早期阶段的标志分子8

（二）脂肪细胞分化中晚期阶段的标志分子9

四、脂肪细胞分化的转录调控9

（一）PPARs10

（二）C/EBPs11

（三）SREBPs12

（四）调控脂肪细胞分化的其他转录因子13

第二章 脂肪代谢与脂肪细胞分化15

一、脂肪代谢概述15

二、脂肪的合成代谢与脂肪细胞分化15

（一）甘油三酯的合成与脂肪细胞分化16

（二）α-磷酸甘油的来源16

（三）脂酰CoA的来源16

三、脂肪的分解代谢与脂肪细胞分化17

（一）脂肪动员与脂肪细胞分化17

（二）甘油代谢17

（三）脂肪酸β氧化18

（四）脂肪酶与脂肪分解18

四、脂滴包被蛋白Perilipin A与脂肪细胞分化21

（一）脂滴包被蛋白概述22

（二）Perilipins的结构22

（三）Perilipin A的功能23

（四）脂肪细胞内调控Perilipin A功能的蛋白因子25

（五）Perilipin A表达水平与机体肥胖、胰岛素抵抗之间的相关性26

第三章 脂肪细胞分化相关的信号转导通路27

一、cAMP/PKA信号通路与脂肪细胞分化27

（一）活化型G蛋白（Stimulating G Protein， Gs）依赖的机制27

（二）磷酸二酯酶（ Phosphodiesterase， PDE）依赖的机制与脂肪细胞分化27

二、MAPK信号通路与脂肪细胞分化29

（一）ERKs信号通路对脂肪细胞分化的调控29

（二）p38 MAPK信号通路对脂肪细胞分化的调控32

（三）JNKs信号通路对脂肪细胞分化的调控33

三、Wnt/β-catenin信号通路与脂肪细胞分化33

（一）Wnt/β-catenin信号通路概述33

（二）Wnt/β-catenin信号通路调控脂肪细胞分化的作用34

（三）Wnt/β-catenin信号通路调控脂肪细胞分化的分子机制35

四、胰岛素受体信号通路与脂肪细胞分化36

（一）胰岛素受体信号通路概述36

（二）炎性信号与胰岛素信号转导缺陷37

（三）胰岛素受体信号通路调控脂肪细胞分化39

五、Jak/STAT3信号通路与脂肪细胞分化40

（一）Jak/STAT3信号通路概述40

（二）Jak/STAT3信号通路调控脂肪细胞分化41

第四章 调节脂肪细胞分化的因素44

一、激素调节44

（一）儿茶酚胺类激素44

（二）胰岛素45

二、细胞因子调节45

（一）肿瘤坏死因子45

（二）瘦素46

（三）白细胞介素-646

（四）脂联素47

三、血糖调节48

四、外源因素调节50

（一）禁食与重新饲喂50

（二）饮食钙50

（三）咖啡因51

（四）乙醇51

（五）维生素A酸52

（六）饱和脂肪酸与多不饱和脂肪酸52

（七）大豆异黄酮52

（八）中药活性成分53

参考文献54

第二部分 试验研究85

第五章 L-Gln对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响85

引言85

一、材料与方法85

（一）试验动物85

（二）试剂85

（三）仪器及器械85

（四）主要溶液配方86

（五）试验分组86

（六）前体脂肪细胞的分离培养及形态学观察86

（七）MTT比色87

（八）油红O染色提取87

（九）油红O染色87

（十）统计方法87

二、结果与分析87

（一）形态观察87

（二）不同处理组对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响88

（三）不同处理组对大鼠前体脂肪细胞分化的影响89

（四）4类培养液中最佳增殖、分化处理组间效果比较89

三、讨论90

参考文献91

第六章 大黄素和大黄酸调控大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的比较研究93

引言93

一、材料与方法93

（一）主要仪器设备及耗材93

（二）试验动物及主要试剂94

（三）前体脂肪细胞培养94

（四）药品处理94

（五）MTT比色测定细胞增殖94

（六）流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡94

（七）油红O染色提取检测细胞分化95

（八）统计学处理95

二、结果95

（一）EMO和RH对前体脂肪细胞增殖的影响95

（二）EMO和RH对前体脂肪细胞的细胞周期和凋亡的影响96

（三）EMO和RH对前体脂肪细胞分化的影响97

（四）EMO对前体脂肪细胞聚脂形态的影响98

三、讨论99

参考文献103

第七章 慢性高剂量胰岛素刺激脂肪分解抑制猪脂肪细胞分化107

引言107

一、材料与方法108

（一）试验动物108

（二）主要试剂108

（三）猪脂肪细胞原代培养108

（四）甘油测定109

（五）RT-PCR检测Perilipin A和PPARγ2的mRNA表达109

（六）Western blot检测perilipin A和PPARγ的蛋白表达109

（七）统计学分析110

二、结果110

（一）慢性高剂量胰岛素对猪脂肪细胞脂肪分解的影响110

（二）慢性高剂量胰岛素对猪脂肪细胞脂质积聚形态的影响110

（三）慢性高剂量胰岛素对异丙肾上腺素刺激的脂肪细胞脂解应答的影响110

（四）慢性高剂量胰岛素对Perilipin A和PPARγ基因mRNA和蛋白表达的影响111

（五）慢性高剂量胰岛素对HSL、ATGL、TNF-α和IL-6基因mRNA表达的影响112

（六）PKA抑制剂对胰岛素刺激的脂肪分解及Perilipin A基因表达的影响113

（七）ERK抑制剂对胰岛素刺激的脂肪分解及Perilipin A基因表达的影响114

三、讨论115

参考文献118

第八章 白细胞介素-6调控猪脂肪细胞分化的作用及其分子机制123

引言123

一、材料与方法124

（一）试验动物124

（二）主要试剂124

（三）猪脂肪细胞原代培养125

（四）甘油含量测定125

（五）RT-PCR检测脂肪细胞分化相关基因的mRNA表达125

（六）Western blot检测脂肪细胞分化相关基因的蛋白表达126

（七）统计学分析127

二、结果与分析127

（一）IL-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响127

（二）IL-6对猪脂肪细胞脂质积聚形态的影响127

（三）猪脂肪细胞中IL-6R和gp130基因的鉴定127

（四）IL-6对猪脂肪细胞Perilipin A、PPARγ2、HSL和ATGL基因mRNA表达的影响128

（五）IL-6对猪脂肪细胞中Perilipin A、PPAR γ、HSL和ATGL蛋白表达的影响129

（六）IL-6对脂肪酸氧化相关基因表达的影响129

（七）PKA信号通路对IL-6刺激的脂肪细胞脂肪分解的影响129

（八）ERK信号通路对IL-6刺激的脂肪细胞脂肪分解的影响130

三、讨论132

参考文献137

第九章 罗格列酮抑制白细胞介素-6对猪脂肪细胞分化的影响143

引言143

一、材料与方法144

（一）试验动物144

（二）主要试剂144

（三）猪脂肪细胞原代培养144

（四）甘油含量测定144

（五）油红0染色提取144

（六）Western blot analysis145

（七）RT-PCR检测 Perilipin A、PPARγ2、FAS、IL-6和PGC-1 α的mRNA表达145

（八）数据分析146

二、结果146

（一）罗格列酮对慢性高剂量IL-6刺激的猪脂肪细胞脂肪分解的影响146

（二）罗格列酮对慢性高剂量IL-6刺激的猪脂肪细胞聚脂形态的影响146

（三）罗格列酮对慢性高剂量IL-6刺激的猪脂肪细胞聚脂含量的影响147

（四）罗格列酮抑制IL-6刺激的ERK1/2磷酸化148

（五）罗格列酮对IL-6刺激的脂肪代谢相关基因mRNA表达的影响148

（六）罗格列酮对慢性高剂量IL-6刺激的猪脂肪细胞Pperilipin A、 PPARγ蛋白表达的影响150

三、讨论150

参考文献152

第十章 慢病毒载体介导shRNA干扰IL-6Rα基因表达削弱IL-6对猪脂肪细胞分化的影响157

引言157

一、材料与方法158

（一）主要试剂158

（二）shRNA oligo序列的设计与合成158

（三）shRNA重组慢病毒表达质粒的构建及鉴定159

（四）重组慢病毒的包装及滴度测定159

（五）猪前体脂肪细胞的原代培养160

（六）慢病毒感染猪前体脂肪细胞160

（七）甘油含量测定160

（八）油红O染色提取法检测脂肪细胞脂质积聚160

（九）RT-PCR检测160

（十）Western blotting检测161

（十一）统计学分析161

二、结果162

（一）IL-6Rα-shRNAs重组表达质粒鉴定162

（二）重组慢病毒包装及滴度测定162

（三）IL-6Rα-shRNAs重组慢病毒对猪脂肪细胞IL-6Rα基因表达的影响162

（四）IL-6Rα-RNAi对IL-6刺激的猪脂肪细胞脂肪分解的影响163

（五）IL-6Rα-RNAi对IL-6刺激的脂肪细胞聚脂含量的影响163

（六）IL-6Rα-RNAi对IL-6刺激的生脂相关基因表达的影响164

（七）IL-6Rα-RNAi对IL-6刺激的ERK1/2磷酸化的影响165

三、讨论165

参考文献168

缩略词表173