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第一部分 发酵工程实验1

Ⅰ.基础实验1

实验一 产淀粉酶芽孢杆菌的分离1

实验二 产蛋白酶菌株的分离1

实验三 乳酸菌素产生菌的筛选4

实验四 紫外线诱变选育α-淀粉酶高产菌株11

实验五 酸性异淀粉酶产生菌的复合诱变育种11

实验六 细菌原生质体融合实验14

实验七 微生物菌种的保藏18

实验八 微生物培养基的优化——单因素实验22

实验九 微生物培养基的优化——正交试验22

实验十 霉菌孢子数及发芽率的测定26

实验十一 细菌生长曲线测定28

实验十二 细菌淀粉酶酶活曲线的测定30

实验十三 机械通风搅拌发酵罐的结构认识及操作30

实验十四 酵母细胞中蔗糖酶粗产物的提取34

实验十五 枯草芽孢杆菌发酵液中α-淀粉酶粗产物的提取34

实验十六 厌氧菌的分离及培养技术34

Ⅱ.综合设计实验37

实验十七 生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌生产实验37

实验十八 柠檬酸发酵39

实验十九 固体发酵生产纤维素酶43

实验二十 酸奶的发酵47

第二部分 细胞工程实验50

Ⅰ.基础实验50

实验一MS培养基母液和培养基的配制50

实验二 植物组织培养技术53

实验三 植物细胞的悬浮培养技术58

实验四 植物原生质体分离鉴定和培养58

实验五 植物细胞融合62

实验六 动物细胞融合62

实验七 动物细胞微丝束的光学显微镜观察62

实验八 线粒体和液泡系的超活染色与观察65

实验九 叶绿体的分离与荧光观察67

实验十 细胞凝集反应69

实验十一 细胞膜的渗透性测定70

实验十二 细胞活力检测72

实验十三 细胞的冻存与复苏72

Ⅱ.综合设计实验73

实验十四 细胞周期检测与同步化73

实验十五 细胞凋亡观察76

实验十六 显微注射技术76

实验十七 杂交瘤技术77

实验十八 植物细胞的有丝分裂观察及染色体标本制备83

实验十九 扫描电子显微镜的原理及操作使用85

实验二十 透射电子显微镜的原理和操作使用85

第三部分 酶工程实验87

Ⅰ.基础实验87

实验一 酵母蔗糖酶的纯化87

实验二 圆盘电泳法鉴定酵母蔗糖酶的纯度89

实验三 酵母蔗糖酶的结晶90

实验四 酵母蔗糖酶的化学修饰90

实验五SDS-PAGE检测蔗糖酶分子质量92

实验六 酵母蔗糖酶的酶促动力学研究92

实验七 固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测95

实验八 木瓜蛋白酶消除啤酒中蛋白质浑浊97

实验九 尼龙固定化木瓜蛋白酶98

实验十 几丁载体上酶的吸附固定98

实验十一β-半乳糖苷酶菌体细胞的固定化99

实验十二 淀粉酶的提取及活力测定102

实验十三 大豆肽的制备102

实验十四 苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定103

实验十五 结晶乳酸脱氢酶（LDH）的制备103

实验十六 辣根过氧化物酶的制备及酶比活力的测定105

实验十七 凝胶层析柱装填及柱效测定106

实验十八 模拟过氧化物酶的制备、固定化及应用112

实验十九 植物组织中蔗糖酶活力的测定112

实验二十 正交法测定几种因素对酶活力的影响113

Ⅱ.综合设计实验117

实验二十一 酸性磷酸酶的分离纯化及活性测定117

实验二十二 碱性磷酸酶的分离、纯化及活性测定131

实验二十三 胰蛋白酶的制备、活力测定及动力学研究131

实验二十四 重组氯霉素酰基转移酶蛋白的表达、分离、纯化和鉴定139

第四部分 基因工程实验145

Ⅰ.基础实验145

实验一 植物基因组DNA的提取145

实验二 细菌基因组DNA的制备145

实验三 质粒DNA的提取及酶切145

实验四 琼脂糖凝胶电泳检测DNA149

实验五 从低熔点胶琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段150

实验六 目的基因的PCR扩增和克隆153

实验七 目的基因的酶切和连接159

实验八 感受态细胞的制备及转化163

实验九 转化子的筛选和鉴定168

实验十 目的基因的原核表达173

实验十一 植物总RNA的提取179

实验十二RNA质量检测179

Ⅱ.综合设计实验180

实验十三 目的基因的RT-PCR检测180

实验十四 目的基因表达的实时荧光定量PCR检测187

实验十五 目的基因的Southern印迹杂交检测190

实验十六 目的基因表达的Northern印迹杂交检测195

实验十七 目的基因表达的Western印迹杂交检测197

实验十八 根癌农杆菌介导的植物基因转化技术200

主要参考文献203