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第一部分　理论部分3

1.1 离心技术3

1.1.1 离心沉降速率影响因素3

1.1.2　沉降系数4

1.1.3 离心设备5

1.1.4 制备超离心法7

1.1.5 离心操作的注意事项9

参考文献10

1.2　层析技术11

1.2.1 层析的基本概念11

1.2.2　层析的基本理论12

1.2.3 层析法的分类13

1.2.4　柱层析的基本装置及操作14

1.2.5 常用的层析方法16

参考文献20

1.3 电泳技术21

1.3.1 电泳的基本原理21

1.3.2 影响电泳的主要因素21

1.3.3 电泳的分类23

1.3.4 电泳系统23

1.3.5 醋酸纤维素薄膜电泳24

1.3.6　聚丙烯酰胺凝胶电泳25

1.3.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳27

1.3.8 连续梯度电泳27

1.3.9 等电点聚焦电泳28

1.3.10 双向电泳29

1.3.11 琼脂糖凝胶电泳29

1.3.12 毛细管电泳29

参考文献30

1.4　生物大分子的制备31

1.4.1 生物大分子制备的前处理31

1.4.2 生物大分子的分离纯化33

参考文献40

第二部分　基本实验43

2.1　基础训练43

2.1.1 生物化学实验要求43

2.1.2 生物样品的采取、处理与保存44

2.1.3 高等植物材料丙酮粉的制备47

2.1.4　缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定48

参考文献51

2.2　蛋白质和氨基酸实验52

2.2.1 蛋白质的两性性质及等电点的测定52

2.2.2氨基酸的薄层层析54

2.2.3 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量55

2.2.4 紫外吸收法测定蛋白质含量57

2.2.5 双缩脲法测定蛋白质含量58

2.2.6 Folin-酚法测定蛋白质含量60

2.2.7 蛋白质的沉淀与变性反应62

2.2.8　蛋白质脱盐（透析和凝胶过滤）64

2.2.9 用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N端氨基酸67

2.2.10　等电点聚焦电泳法测定蛋白质的等电点69

参考文献72

2.3　酶学实验74

2.3.1　酶的基本性质74

2.3.2　过氧化氢酶活力的测定77

2.3.3　脲酶（urease）Km值简易测定法79

2.3.4 淀粉酶活力测定81

2.3.5 转氨酶活性鉴定（纸层析法）84

2.3.6 植物苯丙氨酸解氨酶（PAL）的提取及活性测定86

2.3.7 同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳88

参考文献92

2.4　分子生物学基础实验93

2.4.1 质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测93

2.4.2　聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA97

2.4.3 大肠杆菌感受态的制备和转化实验99

2.4.4 PCR产物的T-A克隆及重组子的蓝白斑筛选103

2.4.5 植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析106

参考文献108

2.5　糖、脂、维生素实验109

2.5.1 蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量109

2.5.2　还原糖含量测定——砷钼酸比色法111

2.5.3　糖的薄层层析113

2.5.4 维生素A的含量测定115

2.5.5 维生素C含量测定——2,6-二氯酚靛酚法118

2.5.6　粗脂肪含量的测定——索氏抽提法120

参考文献122

第三部分　综合性实验125

3.1　酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究125

3.1.1 蔗糖酶的提取与部分纯化126

3.1.2 离子交换柱层析纯化蔗糖酶128

3.1.3　蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定130

3.1.4 分离产物的SDS-PAGE电泳检测133

3.1.5 反应时间对产物浓度的影响135

3.1.6 pH对蔗糖酶活性的影响136

3.1.7 温度对蔗糖酶活性的影响和反应活化能的测定138

3.1.8　底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数Km和最大反应速度Vmax的测定139

3.1.9　尿素（脲）抑制蔗糖酶的实验140

参考文献143

3.2　溶菌酶的分离纯化144

3.2.1 溶菌酶的粗提液的制备144

3.2.2 离子交换柱层析纯化溶菌酶145

3.2.3 溶菌酶的透析与浓缩147

3.2.4　凝胶过滤层析纯化溶菌酶149

3.2.5　溶菌酶的活性测定150

3.2.6　溶菌酶纯度的鉴定152

参考文献154

3.3　猪血超氧化物歧化酶的分离纯化、活性测定及同工酶鉴定155

3.3.1 猪血SOD的提取纯化156

3.3.2　超氧化物歧化酶活性测定157

3.3.3 SOD同工酶鉴定159

参考文献161

3.4　种子蛋白质系统分析163

3.4.1 种子蛋白质含量测定（凯氏定氮法）163

3.4.2　种子蛋白质氨基酸组分分析（氨基酸自动分析仪法）165

3.4.3 种子蛋白质组分分析（连续累进提取法）166

3.4.4 种子蛋白质亚基分析（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）168

参考文献170

第四部分 附录175

一、实验室安全及防护知识175

二、各种仪器的使用注意事项177

三、凝胶数据表181

四、常用缓冲溶液的配制方法184

五、硫酸铵饱和度的常用表189

六、离心力与离心机转速测算表191