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环境工程微生物学实验须知1

第一章 环境工程微生物学基本实验技术2

第一节 准备实验——接种工具与瓶塞及其使用2

一、接种工具2

二、瓶塞（过滤塞）4

第二节 常用器皿及其包装5

一、常用玻璃器皿的种类、规格及使用5

实验1-1 常用玻璃器皿的清洗和包装15

二、环境工程微生物学实验常用设备及使用17

第三节 培养基及其配制22

一、培养基的种类22

二、培养基的配制24

实验1-2 培养基的配制25

第四节 消毒与灭菌技术27

一、湿热灭菌27

二、干热灭菌29

三、紫外灭菌29

四、过滤除菌29

实验1-3 消毒与灭菌31

第五节 接种与无菌操作技术33

一、接种概念33

二、无菌操作的概念33

三、接种与无菌操作的基本要求33

四、接种前的具体准备34

五、接种方法34

六、思考题37

第六节 环境工程微生物的分离与纯化技术37

一、控制培养条件的方法37

二、菌落水平上的分离与纯化38

实验1-4 纯种分离40

三、细胞水平上的分离与纯化42

第七节 菌落形态观察与计数43

一、细菌和酵母菌菌落的异同点44

二、放线菌和霉菌菌落形态的异同点44

实验1-5 微生物培养特征的观察45

第八节 环境工程微生物显微技术46

一、普通光学显微镜47

实验1-6 微生物形态的观察52

实验1-7 显微镜直接计数与微生物悬滴观察53

实验1-8 微生物细胞大小的测定55

二、暗视野显微镜57

实验1-9 暗视野显微镜的使用及活菌体的观察58

三、相差显微镜59

实验1-10 相差显微镜的使用及微生物（酵母）细胞内部结构的观察60

四、荧光显微镜61

实验1-11 荧光显微镜的使用及微生物（酵母和细菌）形态结构的观察63

五、透射电子显微镜63

实验1-12 透射电子显微镜微生物样品的制备与观察66

六、扫描电子显微镜69

实验1-13 扫描电子显微镜微生物样品的制备与观察71

第九节 微生物的制片与染色技术73

一、微生物制片技术73

二、微生物的染色技术74

三、细菌和放线菌的制片与简单染色技术76

实验1-14 细菌和放线菌的制片、简单染色与形态观察76

实验1-15 细菌荚膜、芽孢和鞭毛的制片、简单染色与形态观察77

四、霉菌和酵母菌的制片与简单染色技术79

实验1-16 酵母菌和霉菌的制片、染色技术及形态观察79

实验1-17 革兰染色80

第二章 综合实验 环境工程微生物的群体生长特性与培养技术83

实验2-1 微生物生长曲线的制作（光电比浊计数法测定）83

实验2-2 环境因素（pH、温度、渗透压、化学药物等）对微生物生长的影响85

实验2-3 好氧微生物的培养90

实验2-4 厌氧微生物的培养93

实验2-5 病毒（噬菌体）的培养96

第三章 研究性实验 污染物降解菌的分离与活性测定技术100

实验3-1 酚降解菌的分离与降解活性的测定100

实验3-2 有机磷降解菌的分离与降解活性的测定102

实验3-3 纤维素降解菌（产纤维素酶细菌）的分离与降解活性的测定104

实验3-4 淀粉降解菌（产淀粉酶细菌）的分离与降解活性的测定107

实验3-5 蛋白质降解菌（产蛋白酶细菌）的分离与降解活性的测定109

实验3-6 石油降解菌的分离与降解活性的测定111

实验3-7 氰化物降解菌的分离与降解活性的测定113

实验3-8 硝化细菌的分离与硝化活性的测定116

实验3-9 氨化细菌的分离与活性的测定119

实验3-10 聚磷菌的分离与活性测定121

第四章 环境工程微生物学应用研究型实验125

实验4-1 微生物产沼气125

实验4-2 微生物制氢129

实验4-3 微生物制取酒精（酵母菌的乙醇发酵试验）132

实验4-4 微生物吸附剂的制备136

实验4-5 水中大肠菌群数的测定138

实验4-6 利用Biolog自动分析系统分离鉴定微生物菌群142

第五章 环境工程微生物学现代分子实验技术146

实验5-1 扩增片段长度多态性分析（AFLP）146

实验5 2 限制性片段长度多态性分析（RFLP）150

实验5-3 随机引物扩增多态性DNA分析（RAPD）151

实验5-4 聚合酶链反应（PCR）154

知识拓展 环境工程微生物菌种的保藏156

附录一 常用培养基的配方161

附录二 常用试剂和溶液的配制166

附录三 常用染色液的配制170

附录四 菌种保藏技术172

参考文献173